[发明专利]一种体外扩增人外周血CD3+T细胞的方法

说明书

本发明提供了一种用SA(链亲和素)‐hIL2、SA‐hIL7和SA‐hIL21双功能融合蛋白锚定修饰的磁珠体外高效扩增人外周血CD3⁺T细胞的方法，包括SA‐hIL2/SA‐hIL7/SA‐hIL21双功能融合蛋白的制备及其促T细胞增殖最适浓度的摸索。因hIL2、hIL7和hIL21为IL2家族细胞因子，具有共同的γ链受体，借助生物素与链亲和素的桥联作用将SA‐hIL2、SA‐hIL7和SA‐hIL21双功能融合蛋白共同锚定在已生物素化的磁珠表面，进而通过磁珠的固相表面将CD3⁺T细胞表面的hIL2、hIL7和hIL21受体聚集成簇，从而强烈激活T细胞、并促进其高效扩增。因此，本发明的T细胞体外扩增方法可用于T细胞的过继性免疫治疗。

技术领域

本发明涉及细胞生物学领域，具体涉及一种用SA(链亲和素)‐hIL2、SA‐hIL7和SA‐hIL21双功能融合蛋白锚定修饰的磁珠体外高效扩增人外周血CD3⁺T细胞的方法。

背景技术

过继性免疫细胞治疗(adoptive cell therapy,ACT)技术是通过对自体免疫细胞进行体外激活和扩增,然后将其重新输回肿瘤患者体内,促使其在体内发挥杀伤肿瘤细胞作用的技术,以期改善患者抗肿瘤免疫力，达到治疗和预防复发的目的。效应细胞的种类、数量、活性是直接影响临床疗效的关键。对于晚期实体瘤和血液癌症患者来说，这种ACT技术是一种高度有效且比较安全的治疗手段。ACT疗法中最紧迫的技术问题是产生足够量的抗原(antigen,Ag)特异性T细胞用于回输，故体外大量扩增免疫细胞成为ACT的一个重要环节。

人白细胞介素‐2(IL‐2)是一种T细胞生长因子和信号调节因子，在促进T细胞增殖、增强细胞毒性T细胞、NK细胞和单核细胞的活性、以及诱导B细胞生长和抗体产生方面发挥重要的免疫调节作用。白细胞介素7(IL‐7)是由骨髓基质细胞和胸腺基质细胞产生的细胞因子。不仅是正常T、B淋巴细胞分化和成熟的重要细胞因子，还是多能干细胞和骨髓祖细胞迁移的重要调节因子，而且还能促进NK细胞和成熟T细胞的功能，以及T细胞的生长和分化。人白细胞介素‐21(IL‐21)是与IL‐2、IL‐4、IL7、IL9和IL15共用受体γ链的细胞因子。IL21对各种免疫细胞都具有广泛的调节作用，能促进CD8⁺T细胞和NK细胞功能的成熟，增强其细胞毒活性。T细胞表面可表达多种丝裂原(mitogen)受体，丝裂原可非特异性直接诱导静息T细胞活化和增殖。刀豆蛋白A(concanavalin，ConA)和植物血凝素(phytohemagglutinin，PHA)是最常用的T细胞丝裂原。PHA和ConA通过结合细胞膜糖蛋白(包括T细胞受体(TCR)‐CD3复合物)激活T细胞。

细胞膜表面锚定修饰技术是利用细胞膜表面蛋白质含有伯胺(primary amine)并易于生物素化，借助生物素与链亲和素间的超强特异性结合可使带有SA的蛋白锚定在生物素化的细胞膜表面。同理，我们可将SA‐hIL2、SA‐hIL7和SA‐hIL21双功能融合蛋白共同锚定在已生物素化的磁珠表面，进而通过磁珠的固相表面将CD3⁺T细胞表面的hIL2、hIL7和hIL21受体聚集成簇，从而强烈激活T细胞、并促进其高效扩增。

发明内容

本发明提供了一种用SA‐hIL2、SA‐hIL7和SA‐hIL21双功能融合蛋白锚定修饰的磁珠体外高效扩增人外周血CD3+T细胞的方法，包括SA‐hIL2/SA‐hIL7/SA‐hIL21双功能融合蛋白的制备及其促T细胞增殖最适浓度的摸索。

本发明采用如下技术方案：一种体外扩增人外周血CD3⁺T细胞的方法，利用锚接有hIL2、hIL7和hIL21细胞因子的磁珠的固相表面将CD3+T细胞表面的细胞因子受体聚集成簇，激活T细胞，实现T细胞的高效扩增。