[发明专利]一种间充质干细胞成软骨诱导分化培养基

说明书

本发明公开了一种间充质干细胞成软骨诱导分化培养基，包括DMEM基础培养基和添加剂，所述添加剂包括转铁蛋白、胰岛素、亚硒酸钠、抗坏血酸、脯氨酸、地塞米松和转化生长银子2型。本发明能够让间充质干细胞在立体空间形成三维类软骨球，不需要额外添加载体或设备。

发明领域

本发明涉及用于间充质干细胞定向分化为三维软骨球体的诱导培养基。

背景技术

干细胞研究是目前生物医学行业最热门的方向之一；干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成为多种功能性细胞。根据干细胞所在的发育阶段可以分为胚胎干细胞和成体干细胞。由于胚胎干细胞涉及道德伦理的问题，所以在研究和应用上大家多选择成体干细胞。成体干细胞多分为间充质干细胞，其来源丰富，动物体的骨髓、脂肪、皮肤、甚至牙髓等组织均可提取；其分化能力也很强，在特定条件下具备良好的单方向分化能力，因而在再生医学上应用广泛。

间充质干细胞在特定条件下可以分化为软骨细胞或者软骨前体细胞，常规的多方向诱导均在二维平面空间进行，而在平面诱导软骨细胞的过程中，由于细胞骨化而导致细胞贴壁性下降，细胞整片脱落；细胞脱落则直接导致诱导失败。本发明可在三维空间进行，则直接解决因为细胞脱落而造成的失败，其次，高密度的细胞球也在模拟体内软骨发育的过程，细胞之间的紧密粘附和生长有利于细胞之间的信号传递，也利于细胞外基质的分泌，更容易形成组织微环境。

本发明避开干细胞在平面生长诱导的情况，将细胞设计在无菌试剂管中立体培养；更佳的，为了避免胎牛血清对于细胞的促贴壁生长的作用，在培养基主体的选择上选择了无血清的体系，在无血清的培养基体系中，更需要注重细胞生长蛋白的优化，为了达到蛋白混合液可支撑细胞球体生长，但不至于疯狂长大影响诱导结果，本发明选择转铁蛋白-胰岛素-亚硒酸钠混合蛋白液，明确培养体系中蛋白质的结构，减少实验的影响因素。

发明内容

本发明的目的在于提供一种三维的间充质干细胞定向分化为软骨球体的诱导分化培养基。

本发明所采取的技术方案是：

一种间充质干细胞成软骨诱导分化培养基，采用基础细胞培养基，含有0.1-5％的蛋白混合物，50-500μM 的抗坏血酸，0.8-8mM的脯氨酸，50-500nM的有机刺激剂地塞米松，以及提供信号通常方向的5-50ng/ml 的转化生长因子2型。

优选的，蛋白混合物中包含0.1-2mg/mL的转铁蛋白、0.1-1mg/mL的胰岛素和0.1-2μg/mL亚硒酸钠。

优选的，基础培养基中包含一种或多种无机盐、氨基酸、维生素、抗生素和能量源等。

附图说明

图1是人间充质干细胞三维诱导成软骨球；

图2是人间充质干细胞软骨球切片阿利新蓝染色图；

图3是兔间充质干细胞成软骨切片阿利新蓝染色图；

图4是大鼠间充质干细胞成软骨切片阿利新蓝染色图；

具体实施方式

为了更好地说明本发明，下面结合具体实施例做进一步说明。

实例1：