[发明专利]一种超高效合相色谱-串联质谱技术拆分、测定手性农药苯霜灵对映体的方法

权利要求书

1.一种超高效合相色谱-串联质谱技术拆分、测定手性农药苯霜灵对映体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)样品前处理；

(2)检测条件：将待测样品进行合相色谱-串联质谱检测，根据洗脱峰保留时间、目标化合物定量离子对和定性离子对确认各个洗脱峰，即得到各个手性农药对映体，

合相色谱检测条件如下：色谱柱：规格150 mm×3.0 mm，2.5µm的 ACQUITY UPC²Trefoil CEL1柱 ；流动相：超临界CO₂/异丙醇，流速：2mL/min；梯度洗脱； 柱温：45 ℃；背压：2000 psi；进样量：2µL；梯度洗脱方式具体如下：初始至第2分钟CO₂和异丙醇的体积比由99%:1%变成95%:5%; 第2分钟到第3.5分钟CO₂和异丙醇的体积比从95%:5%变成90%:10%;第3.5分钟到第4分钟CO₂和异丙醇的体积比从90%:10%变成99%:1%;第4分钟到第6分钟CO₂和异丙醇的体积比为99%:1%；

所述根据洗脱峰保留时间、目标化合物定量离子对和定性离子对确认各个洗脱峰的方法如下：

保留时间为2.80分钟、定量离子对为326.1/91、定性离子对为326.1/148的洗脱峰即为S-苯霜灵；

保留时间为3.12分钟、定量离子对为326.1/91、定性离子对为326.1/148的洗脱峰即为R-苯霜灵；

(3)检测方法：配制R-苯霜灵和S-苯霜灵基质混合标准工作溶液，按照步骤(2)提供的色谱条件进行分离，并记录每种对映体对应的峰面积，以每种对映体的浓度值为自变量，以其对应的峰面积为因变量，得到R-苯霜灵和S-苯霜灵的一元线性回归方程；

将待测样品按照前述方法进行分离，并记录每种对映体对应的峰面积；将每种对映体对应的峰面积代入上述一元线性回归方程，即得到待测样品中苯霜灵各个对映体的浓度。

2.根据权利要求1所述的拆分、测定手性农药苯霜灵对映体的方法，其特征在于：步骤(1)中的样品前处理过程具体如下：准确称取2 g研磨后的粉末样品于50 mL具盖离心管中，加入10mL水，泡发后加入10 mL乙腈，然后将离心管置于涡漩混合振荡仪上，以2000 rpm 速率振荡5 min；然后向离心管中加入5g 无水硫酸镁、1 g 氯化钠、1 g 柠檬酸钠和0.5 g柠檬酸氢二钠至离心管中，立即于漩涡混合振荡仪上，以2000 rpm速率振荡5 min，然后以6000 rpm速率离心3 min；移取上清液1.0 mL于1.5 mL离心管中，并加入50 mg C18和50 mg中性氧化铝，于漩涡混合振荡仪上以2000 rpm速率振荡2 min，以6000 rpm 速率离心3min；吸取上清液经0.45 μm有机相滤膜过滤，取200µL过滤液，用800µL叔丁基甲醚稀释5倍，即为待测样品溶液。

3.根据权利要求1所述的拆分、测定手性农药苯霜灵对映体的方法，其特征在于：步骤(2)中的质谱条件中，离子源为电喷雾离子源(ESI)；扫描方式为正离子扫描；毛细管电压为2.6KV；离子源温度150℃；脱溶剂气温度350℃；脱溶剂气体流速650 L/h；锥孔气体流速50L/h；补偿溶剂0.1%甲酸甲醇溶液，流速为0.2 mL/min；

苯霜灵的去簇电压和碰撞能量如下：

苯霜灵定量离子对和定性离子对的去簇电压均为26V，碰撞能量分别为34V和20V。

4.根据权利要求1所述的拆分、测定手性农药苯霜灵对映体的方法，其特征在于：步骤(3)中的苯霜灵的一元线性回归方程如下：

R-苯霜灵：Y=344X+759,线性范围为25ng/mL-500ng/mL，线性相关系数0.9998;

S-苯霜灵：Y=306X+799,线性范围为25ng/mL-500ng/mL，线性相关系数0.9999。