[发明专利]一种超高效合相色谱-串联质谱技术拆分、测定手性农药苯霜灵对映体的方法

说明书

本发明属于分析化学领域和农药残留检测技术领域，具体是一种超高效合相色谱‑串联质谱技术拆分、测定手性农药苯霜灵对映体的方法，涉及手性农药的外消旋体的拆分及定量方法。该方法采用QuEChERS方法提取烟草、谷物及干果中的苯霜灵，用合相色谱手性固定相结合三重四极杆串联质谱检测苯霜灵手性农药的对映体。本发明首次采用合相色谱快速的对苯霜灵进行手性分离，灵敏度高。以超临界CO₂为流动相，节省了大量有机溶剂的使用，绿色环保。

技术领域

本发明属于分析化学领域和农药残留检测技术领域，具体是一种超高效合相色谱-串联质谱技术拆分、测定手性农药苯霜灵对映体的方法，涉及手性农药的外消旋体的拆分及定量方法。

背景技术

手性农药的对映体在环境中的消解和归趋往往也有明显的不同。即手性农药对映体在自然环境和生物体中的活性、毒性以及吸收、代谢、降解等诸多方面可能存在巨大差异。

手性分析是一个有力工具，可以帮助人们检测和深入认识手性农药对环境的生化影响过程，对手性农药的全面深入了解有助于生产对映体纯度的产品，最大限度地减小农药对环境带来的负面影响。手性化合物的拆分常用的是色谱法，其不仅是对映体分析和纯度测定的有力工具，而且还是制备和纯化的重要手段。应用于手性分离的色谱技术主要包括气相色谱(GC)、薄层色谱(TLC)、高效液相色谱(HPLC)、毛细管电泳色谱(CE)和超灵界流体色谱(SFC)等。但传统的气相色谱、液相色谱法对载气、流动相的要求高，溶剂使用量大，对环境污染影响大，且方法开发的复杂性高，而合相色谱能更好地解决这些问题。

近年来，基于超临界流体色谱原理发展起来的合相色谱技术( ConvergenceChromatography) ，以超临界流体状态 CO ₂ 为主要流动相，辅以一定比例的有机溶剂作为改性剂，以实现化合物的分离分析。合相色谱综合了超临界流体色谱( SFC) 和液相色谱(LC) 的优点，介于气相色谱和液相色谱技术之间，分析条件温和、不受样品挥发性的限制，其固定相可采用现有的正相、反相固定相材料，既可分析不适宜气相色谱分析的高沸点、低挥发性样品，又能对普通液相色谱难分离的结构类似物、手性化合物等进行分离分析。

农药苯霜灵是一种易被植物吸收、上行传导的高效杀菌剂。该农药市售品为其R、S的外消旋体。但是药理研究表明，苯霜灵的主要杀菌效果来自于R体。侯经国等【分析化学，2006，11(34),1424-1528】采用手性色谱柱经高效液相色谱分离了苯霜灵的一组对映体，但是该方法手性柱合成繁琐，分离时间长，消耗大量的有机溶剂。冯硕立等【浙江工业大学，硕士论文】等采用性色谱柱经超临界流体色谱分离了苯霜灵的一组对映体，但是分离时间较长。建立苯霜灵对映体纯度的测定方法对于开发生产R体苯霜灵单一产品和生产厂家进行产品质量控制是十分必要的。

发明内容

本发明的目的是提供一种采用合相色谱-串联质谱技术拆分、测定手性农药苯霜灵对映体的方法，该方法能快速、准确的将外消旋的苯霜灵的一组对映体进行分离，并且可以准确定量，基质干扰少，环境友好。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种超高效合相色谱-串联质谱技术拆分、测定手性农药苯霜灵对映体的方法，包括以下步骤：

(1)样品前处理；样品可为烟草、谷物或干果。

(2)检测条件：将待测样品进行合相色谱-串联质谱检测，根据洗脱峰保留时间、目标化合物定量离子对和定性离子对分离各个洗脱峰，即得到各个手性农药对映体，

a、合相色谱检测条件如下：色谱柱：规格150 mm×3.0 mm，2.5µm的 ACQUITY UPC²Trefoil CEL1柱；流动相：超临界CO₂/异丙醇，流速：2mL/min；梯度洗脱；柱温：45 ℃；背压：2000 psi；进样量：2µL；