[发明专利]一种透明质酸修饰的阳离子类脂质体、制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种透明质酸修饰的阳离子类脂质体、制备方法及其应用。本发明以非离子表面活性剂、辅助磷脂和阳离子磷脂为主要成膜材料，外层包裹修饰透明质酸；其中，非离子表面活性剂为吐温80或司盘80，辅助磷脂为角鲨烯或胆固醇。本发明的有益效果在于：本发明获得透明质酸修饰的阳离子类脂质体基因转染效率高，可以特异性靶向到眼部视网膜层，作为眼部基因递送载体。

技术领域

本发明涉及类脂质体及基因递送技术领域，具体涉及一种透明质酸修饰的阳离子类脂质体、制备方法及其应用。

背景技术

眼部疾病中，眼底病是临床上多见而又比较难治的一类眼病。眼底相关疾病，诸如糖尿病性视网膜病变、非青光眼视神经损伤等，均与死亡率存在较大的关系。目前，眼底病严重影响到人们的生活质量。目前针对眼底疾病的治疗，主要包括外科手术治疗和药物治疗两种方式。一般来说，外科手术治疗存在一定的风险性，而且会对病变周围组织产生一定不可逆的伤害。而传统药物治疗又具有治标不治本、副作用多的缺陷，而且由于不能从根本上解决疾病，只能单纯通过抑制来控制疾病，也就导致了患者需要频发且长期用药，使得经济负担增加。

基于现有药物治疗的很多缺陷，近年来很多学者把目光转向了基因治疗领域。采用基因治疗眼底疾病，通过校正基因错序、修补遗传错误或产生治疗因子的方式，阻碍或促进特定蛋白质的表达，最终从基因水平根本性地进行治疗。

近年来，类脂质体被认为是常规脂质体的潜在替代输送系统。与磷脂囊泡相比，类脂质体具有类似脂质体的双层结构，但具有更大的可及性、稳定性和较低的成本等优势。此外，与脂质体和聚合物相比，类脂质体细胞存活率更高，表明细胞毒性较低。作为基因载体，类脂质体具有较好的转染效率。利用角鲨烯作为辅助脂质，有报道称，类脂质体通过结构转移增强了溶酶体的逃逸能力。同时，针对RPE细胞上CD44高表达的情况，在类脂质体外层修饰以能够靶向到CD44的透明质酸，能够实现细胞靶向的效果。因此，透明质酸修饰的阳离子类脂质体是一种极具潜力的新型基因递送载体。

发明内容

为了克服现有的外科手术治疗及药物治疗的不足，本发明的目的在于提供一种透明质酸修饰的阳离子类脂质体，用于眼部基因递送的研究。该基因递送载体具有低细胞毒性、高稳定性、转染效果强的特点，能够在眼部视网膜细胞中进行有效地基因递送。

本发明的另一个目的在于提供该眼部基因递送载体——透明质酸修饰的阳离子类脂质体的制备方法。

本发明的技术方案具体介绍如下。

本发明提供一种透明质酸修饰的阳离子类脂质体，其以非离子表面活性剂、辅助磷脂和阳离子磷脂为主要成膜材料，外层包裹修饰透明质酸；其中，非离子表面活性剂为吐温80或司盘80，辅助磷脂为角鲨烯或胆固醇。

本发明中，其粒径为100-300nm，Zeta电位为-5～-80mV。

本发明还提供一种上述的阳离子类脂质体的制备方法，具体步骤如下：

(1)将非离子表面活性剂、辅助磷脂、阳离子磷脂混合，完全溶解在无水乙醇中；

(2)将乙醇溶液匀速注入到温度为40-80℃的缓冲盐溶液中，并以搅拌30-50nin，再于超滤膜下超滤1-3次，得到阳离子类脂质体；

(3)将透明质酸加入到步骤(2)得到的阳离子类脂质体中，37℃孵育20-40min，得到透明质酸修饰的阳离子类脂质体。

本发明，步骤(1)中，非离子表面活性剂和辅助磷脂摩尔比为5:2～5:8，阳离子磷脂和非离子表面活性剂的质量比为7:100～13:100。

本发明中，步骤(3)中，透明质酸的分子量范围为500-3900kDa。

本发明中，HA-DOPE与阳离子类脂质体的质量比为1：10-1：5。

和现有技术相比，本发明的有益效果在于：