[发明专利]检测ABCG8内含子4突变的引物、方法和试剂盒

说明书

本发明公开了检测植物固醇血症相关基因ABCG8内含子4区域12902T>C突变的引物、试剂盒和方法。采用Sanger测序技术，可快速发现该区域突变位点，该突变位点的发现便于判断和分析产生ABCG8基因突变是否会造成植物固醇血症，以及辅助查明造成该病的病因。

技术领域

本发明属生命科学和生物技术领域，特别涉及检测植物固醇血症ABCG8基因内含子4突变的引物，采用普通PCR技术，可用于快速检测ABCG8内含子4的突变情况。

背景技术

ABCG8基因是编码ATP结合盒(ABC)转运蛋白超家族成员。由该基因ABC蛋白编码的蛋白质通过跨细胞膜和胞内膜运输各种分子。ABC基因分为七个不同的亚家族(ABC1、MDR/TAP、MRP、ALD、OABP、GCN20和White)，该蛋白是白亚家族的成员。该基因编码的蛋白质的功能是排除非胆固醇甾醇进入肠道水平，促进胆固醇和甾醇排泄到胆汁中，并使甾醇转运回肠腔。它以组织特异性方式在肝肠和胆囊中表达。该基因在2号染色体上排列整齐，与家庭成员ABCG5呈头颅取向。该基因的突变可能导致甾醇积累和动脉粥样硬化，并已观察到在谷甾醇血症患者中ABCG8突变常染色体隐性遗传，无论是在家庭之间和家庭之内具有广泛的临床严重性。

由于ABCG8没有热点突变，而且有许多突变没有被报导过。我们通过对ABCG8基因编码外显子的DNA测序、患者DNA在正向和反向上都被测序。如果发现突变，然后进行文献比对，从而确定是否是新的突变。发现ABCG8突变非常重要，因为任何ABCG8突变都会影响甾醇积累，而且有可能是家族性的。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测ABCG8基因内含子4突变的引物，采用PCR技术，可用于快速检测ABCG8基因内含子4的突变情况，并发现植物固醇血症遗传相关的突变类型，从而为判断植物固醇血症遗传信息提供依据。

检测ABCG8内含子4基因突变的引物，其特征在于，包括扩增ABCG8基因内含子4序列的引物，其碱基序列为：

ABCG8-intron4-F:TGTAAAACGACGGCCAGTCACCTCTCTAGGGGCTGGTC

ABCG8-intron4-R：AACAGCTATGACCATGCGGAAGGCAAGCTGAGTTGT。

进一步地，检测ABCG8内含子4基因突变的引物还包括测序引物，其碱基序列为：

M13-F：TGTAAAACGACGGCCAGT

M13-R：AACAGCTATGACCATG。

进一步地，ABCG8内含子4基因突变包括12902T>C突变点。

本发明还提供了检测ABCG8内含子4基因突变的方法，包括以下步骤：

(1)抽提血液中的基因组DNA；

(2)用PCR扩增步骤1中提取的DNA；其中扩增ABCG8基因内含子4的引物的碱基序列为：

ABCG8-intron4-F:TGTAAAACGACGGCCAGTCACCTCTCTAGGGGCTGGTC

ABCG8-intron4-R：AACAGCTATGACCATGCGGAAGGCAAGCTGAGTTGT；

(3)对步骤2中的扩增产物进行测序；测序引物的碱基序列为：

M13-F：TGTAAAACGACGGCCAGT

M13-R：AACAGCTATGACCATG；

(4)对测序结果进行判断，确定ABCG8内含子4基因位点是否发生突变。