[发明专利]一种虾蟹养殖水体解毒剂及其制备方法

权利要求书

1.一种虾蟹养殖水体解毒剂，其特征在于，包括γ-聚谷氨酸发酵粉和屎肠球菌粉。

2.根据权利要求1所述的一种虾蟹养殖水体解毒剂，其特征在于，还包括：玉米淀粉、小麦粉、石粉、沸石粉和糠粉。

3.一种虾蟹养殖水体解毒剂的制备方法，其特征在于，由以下过程制备而成：

(一)制备γ-聚谷氨酸发酵粉

(1)菌株的活化

所述菌株采用纳豆芽孢杆菌。

将原始菌株接种在斜面固体培养基上，于37℃培养16h，如此活化2-3次，制备成熟的斜面种子；

(2)种子液的制备

将活化后的斜面种子接种于装有50mL液体培养基的500mL三角瓶中，37℃，220rpm培养16h至对数生长期；

(3)发酵罐发酵

将步骤(2)中的种子液以5％的接种量接种于发酵罐，30L发酵罐发酵培养基装液量为12L，初始发酵温度38-40℃，罐压0.01-0.05Mpa，通风量0.5-1.0vvm，转速400-600rpm；当发酵液OD₆₆₀在0.550-0.600时，控制发酵温度30-35℃，调节转速至200-350rpm，通风量1.5-2.0vvm，控制pH在7.2-7.5至发酵结束前2-6h，得到γ-聚谷氨酸发酵液；

(4)制备γ-聚谷氨酸发酵粉

1)γ-聚谷氨酸发酵液用水稀释2-3倍，调整pH值为2.8～3.2；

2)用高效板式密闭过滤机进行过滤除菌，所用助滤剂为珍珠岩；

3)调整步骤2)所得滤液pH值为6.9-7.3，用4倍体积乙醇进行沉淀，在乙醇中静置170-190min，脱去沉淀中的水分；

4)离心，分离出沉淀，所得沉淀在0.2Mpa下进行减压干燥，得γ-聚谷氨酸粗品；

5)用等体积的去离子水溶解步骤4)所得γ-聚谷氨酸粗品，调整pH值为6.9～7.1，加入蛋白酶37℃保温60min，去除杂蛋白；

6)调整pH值为2.9-3.1，超滤去除色素及小分子杂质；

7)调整pH值为6.9-7.1，乙醇沉淀，所得沉淀在0.2Mpa下进行减压干燥，得高纯度γ-聚谷氨酸发酵粉

(二)制备屎肠球菌粉

(三)制备解毒剂

按照重量比4:4:1:1:1:1:1的比例加入γ-聚谷氨酸发酵粉、屎肠球菌粉、玉米淀粉、小麦粉、石粉、沸石粉、糠粉，并充分混合均匀，得到解毒剂。

4.根据权利要求3所述的一种虾蟹养殖水体解毒剂的制备方法，其特征在于，所述斜面固体培养基的组成为：琼脂18-20g、蛋白胨8-10g，牛肉膏5-7g，氯化钠5-7g，蒸馏水1000mL。

5.根据权利要求2所述的一种虾蟹养殖水体解毒剂的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基和所述种子培养基的组成均为：蛋白胨8-20g，酵母膏5-15g，磷酸氢二钾0.2-2g，磷酸二氢钾0.2-2g，硫酸镁0.1-2g，葡萄糖8-20g，碳酸钙1-10g，水1000mL。

6.根据权利要求2所述的一种虾蟹养殖水体解毒剂的制备方法，其特征在于，所述屎肠球菌粉的制备过程如下：

(1)种子培养：配制液体培养基并调节pH值至6.5-7.5，将液体培养基分装到2000mL锥形瓶中，每瓶装1400-1600mL，121℃灭菌20-30min，冷却后将保存的屎肠球菌接种至锥形瓶中，于厌氧条件下30-38℃培养14-24h，将长好的屎肠球菌种子以5％-10％的接种量转接入2000mL三角瓶液体培养基中，于30-38℃静止培养14-24h，得到种子液；

(2)种子罐培养：在种子罐中加入液体培养基，装液量为70％，调节pH值6.5-7.5，开搅拌，121℃灭菌20-30min，开冷却水降温，并通无菌氮气控制罐压为0.04-0.06MPa，当温度降至36-38℃时，将长好的种子液以5％-10％的接种量转入种子罐的液体培养基中，保持30-38℃、罐压0.04-0.06MPa，静止培养14-24h；

(3)发酵罐培养：当种子罐培养液的pH值降至4.5-5.0，菌数达到5-15亿cfu/mL时，将种子罐中的培养液以5％-10％的接种量转入1m³发酵罐中的液体培养基中，保持30-38℃、罐压0.04-0.06MPa，静止培养14-24h；发酵罐培养基组成和配制方法与种子罐相同。

(4)制备屎肠球菌粉：当发酵罐培养液中的屎肠球菌的活菌数达到20亿cfu/mL时，通过转移管道将发酵罐与离心机转接，设置离心机转速14000r/min。将由离心机内收集到的湿状菌泥与淀粉按1：6的重量比充分混匀后倒入捏合机内，充分捏合。将由捏合机内收集到的的菌泥，送入热风循环烘箱，设定温度45±2℃，时间10h；将烘干后的菌粉冷却后，加入粉碎机粉碎，过80目筛，得屎肠球菌粉。