[发明专利]人源化GITR基因改造动物模型的制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种GITR基因人源化动物模型的制备方法及应用。本发明还保护一种能够特异的靶向Gitr基因的sgRNA序列、一种多基因人源化动物模型的制备方法以及相关应用。本发明提供了一种适合人源细胞或组织移植的工具小鼠，一种新的人源化动物模型制备方法，有利于相关疾病的研究，为生物医学实验的开展提供了有效的技术手段。本发明还涉及人源化基因改造非人动物，特别是基因改造啮齿动物，但尤其是基因改造小鼠，具体涉及人源化GITR基因动物模型的构建方法及其在生物医药领域的应用。

技术领域

本申请涉及人源化基因改造动物模型的建立方法及应用，具体而言，涉及基于一种人源化GITR基因改造动物模型的构建方法及其在生物医药的应用。

背景技术

免疫疗法通过激活免疫系统攻击并杀死癌细胞，是近年来肿瘤研究的一个重要领域。目前和肿瘤免疫治疗相关的一些药物已经用于治疗，已有药品上市并应用在多个适应症，如靶向T细胞共刺激分子CTLA-4、PD-1及其配体的单克隆抗体已经取得确切疗效，但病人的平均应答率较低，临床实践已经证明，单一的免疫治疗策略治疗效果有限，在临床中一般需要结合两种或多种免疫治疗手段进行。开发更多可以用于提高免疫系统对肿瘤识别及杀伤能力的药物一直是免疫学研究的热点之一。

糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(Glucocorticoid-induced tumornecrosis factor receptor，GITR)分子是一种I型跨膜蛋白，属于肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族成员，包括胞外区、跨膜区域和胞浆区，在Treg细胞的高水平表达，也在CD4+和CD8+T细胞上低水平表达，经刺激活化后表达显著增加。GITR的配体GITRL，为肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员，主要表达在抗原呈递细胞(APC)。GITR与GITRL结合后，传导T细胞表面的共刺激信号，和CD28、CD3一起辅助T细胞受体(TCR)的作用，刺激T细胞活化、增殖和分泌细胞因子(但其辅助刺激作用没有CD28强烈)；抑制Foxp3+Tregs免疫抑制活性；诱导激活巨噬细胞。

已有研究证明GITR在多种免疫过程中起重要作用，在感染、肿瘤和自身免疫/炎性疾病治疗领域具有巨大应用价值。激动性GITR抗体可在小鼠体内诱发包括自身免疫性胃炎、卵巢炎、自身免疫性脑脊髓炎在内的多种自身免疫性疾病(Takahashi T et al.J ExpMed.2000Jul 17；192(2):303-10；Shimizu J et al.Nat Immunol.2002Feb；3(2):135-42；J Immunol April 15,2004,172(8)4686-4690)，激动性GITR抗体也可在体外或体内抑制多种肿瘤的生长，且与其他免疫检查点抗体或肿瘤抗原联合使用可表现出比单一疗法更好的抗肿瘤效果(Ko K.et al,J Exp Med.2005 Oct 3；202(7):885-91；Clin Cancer Res.2010May 15；16(10):2781-91；Cohen AD.et al,PLoS One.2010；5(5):e10436；Miska J et al,Cancer Immunol Immunother.2016 Dec；65(12):1555-1567；Villarreal DO et al,Oncotarget.2017 Mar 27.doi:10.18632/oncotarget.16605)；阻止GITR与GITRL结合能抑制淋巴细胞增殖，有利于改善某些自身免疫性疾病的进展，并能通过维持Treg的功能，降低移植排斥，从而提高移植成功率(Ma J et al.Am J Pathol.2016Jun；186(6):1559-67；Sonawane SB et al.Transplantation,2009,88(10):1169-1177)。此外，GITR还参与并增强抗病毒反应(Agostini M et al.Infect Immun.2005Nov；73(11):7502-8)。