[发明专利]一种多肽及在促进骨髓间充质干细胞增殖方面的应用

权利要求书

1.一种促进骨髓间充质干细胞增殖的多肽，其特征在于，通过如下步骤制备而成：

步骤1、六棱菊种子多肽冻干粉的制备

六棱菊种子经碱性蛋白酶Alcalase2.4L+胰蛋白酶在复合配比3:1、pH为7.4、温度60℃、底物质量浓度40g/L、加酶量6％、酶解时间6h的条件下酶解，酶解结束后升温至90℃保持适当时间进行灭酶处理得六棱菊种子蛋白酶解溶液。将酶解液装入截留分子量为7000Da的透析袋中透析，将含有分子量小于7000Da的透析袋外部水溶液减压浓缩，然后将浓缩的多肽溶液于冷冻干燥机中冻干，即得六棱菊种子多肽冻干粉。

步骤2、大孔树脂初步分离纯化

采用DA201-C型大孔树脂对多肽冻干粉按疏水性进行初步分离纯化：

(1)先将树脂用无水乙醇浸泡24h，然后用无水乙醇洗至220nm无吸收，再用去离子水洗净后备用；常温下将浓度为50mg/mL的多肽冻干粉水溶液以0.5BV/h的流速流经层析柱，用紫外检测器检测流出液的吸光值A220，以A220＝0.05为穿透点；

(2)上样结束后，用去离子水以1BV/h的流速冲洗层析柱，分管收集洗脱液，测定水的电导率，当电导率降至与去离子水相当时，依次采用30％、45％、60％、75％的乙醇对吸附在大孔吸附树脂上的多肽冻干粉进行梯度洗脱，每个梯度洗脱4BV，收集75％乙醇洗脱液，45℃真空旋蒸浓缩至无醇味，冷冻干燥得F75粗品。

步骤3、凝胶过滤色谱纯化

将F75粗品配成浓度为50mg/mL的样品溶液，采用柱尺寸为1.6×100cm的Sephadex G-15凝胶滤过色谱再进行进一步分离纯化，上样量1mL，洗脱液为去离子水，流速为15mL/h，检测波长220nm，根据色谱图收集样品溶液中吸光度最高的色谱峰对应的洗脱流份，冷冻干燥，得到多肽F75。

2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于：所述六棱菊种子为六棱菊属植物六棱菊的种子，洗净晾干，粉碎成80目细粉。

3.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于：碱性蛋白酶Alcalase2.4L酶活力为2.4AU/g。

4.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于：胰蛋白酶的酶活力为2500U/g。

5.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于：酶解结束后升温至90℃保持20min灭酶。

6.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于：将含有分子量小于7000Da的透析袋外部水溶液于55℃旋转蒸发减压浓缩。

7.权利要求1所述的多肽在促进骨髓间充质干细胞增殖方面的应用。