[发明专利]检测孔雀石绿的核酸适配体电化学生物传感器及制备方法

权利要求书

1.一种检测孔雀石绿的适配体电化学生物传感器，其特征在于，包括识别元件、丝网印刷电极和基板，所述识别元件包括2个单链DNA适配体，一个为在3’端修饰了-SH-(CH2)6-的适配体1，一个为在5’端修饰了生物素的适配体2。

2.根据权利要求1所述的检测孔雀石绿的适配体电化学生物传感器，其特征在于，适配体1序列为3′-SH-(CH2)6-TGG AAG GAG GCG TTA TGA GGG GGT CCA CG-5′，适配体2序列为5’-bio-GCA CCT TCC TCC GCA ATA CTC CCC CAG GTG C-3’。

3.根据权利要求1所述的检测孔雀石绿的适配体电化学生物传感器，其特征在于，所述丝网印刷电极包括工作电极、辅助电极和参比电极。

4.根据权利要求3所述的检测孔雀石绿的适配体电化学生物传感器，其特征在于，所述工作电极、辅助电极材料为碳，参比电极材料为为Ag/AgCl。

5.根据权利要求1所述的检测孔雀石绿的适配体电化学生物传感器，其特征在于，所述基板为PVC材料。

6.一种检测孔雀石绿的适配体电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1、丝网印刷电极预处理：将丝网印刷电极清洗干净后吹干；

步骤2、在工作电极表面修饰纳米金：将印刷电极浸置在1mg/mL的HAuCl4溶液中进行时间电流法扫描，扫描电压为-0.2V，扫描时间为100s，扫描结束后，工作电极表面形成纳米金结构，再将丝网印刷电极清洗干净后吹干；

步骤3、在工作表面固定适配体1：在工作电极表面滴加3ul的1uM的Apt1，在4℃下静置16h，待apt1完全固定在工作电极表面,再将丝网印刷电极清洗干净后吹干；

步骤4、工作电极上滴加目标检测物：在工作电极表面滴加3ul待测浓度的孔雀石绿，待孔雀石绿与适配体1特异性结合；

步骤5、在工作电极上固定适配体2：在工作电极上滴加3ul的1uM有生物素标记的适配体2，静置1h，等待Apt1,MG,bio-Apt2形成三明治夹心结构，再将丝网印刷电极清洗干净后吹干；

步骤6、在工作电极上固定亲和素标记的辣根过氧化物酶：在工作电极上滴加过量亲和素标记的辣根过氧化物酶，室温下静置20min，等待生物素与亲和素结合，再将丝网印刷电极清洗干净后吹干。

7.基于适配体电化学生物传感器的孔雀石绿检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1、待测样本的循环伏安法扫描：将电化学检测仪三个接头分别与待测样本的适配体电化学生物传感器的丝网印刷电极的三个电极相连，将丝网印刷电极放入H₂O₂与TMB的混合溶液中，进行循环伏安法扫描，起始电位0V，最高电位0.7V，终止电位0V，扫描速度0.1V，扫描一周得到循环伏安曲线，与无样本循环伏安法扫描的循环伏安曲线对比定性分析检测物，若样本电流峰值提高，则判定有孔雀石绿进一步检测浓度；

步骤2、待测样本的时间电流法扫描：将待测样本的适配体电化学生物传感器的丝网印刷电极放入H₂O₂与TMB的混合溶液中，进行时间电流法扫描，扫描电位0.1V，扫描时间100s，得到时间电流曲线定量分析检测物浓度：

y＝2.736x+2.338

式种，y为待测样本的浓度的对数值，x为电流稳定后的安培信号量。