[发明专利]功能基化的脂质体及其制备方法及应用

说明书

本发明的主要是一种功能基化的脂质体及其制备方法及应用。通过无生物活性的多肽分子通过偶联反应和置换反应与磷脂形成磷脂‑多肽‑磷脂的偶联物，并且通过制备的连接物和磷脂/胆固/磷脂‑PEG合成脂质体，即可得到多肽修饰的脂质体。该脂质体表面的多肽，以弧状稳定存在于脂质体表面。在适当的构象调控下，无活性的多肽被赋予了生物活性从而构建了具有靶向性的脂质体基人工抗体。

技术领域

本发明涉及一种功能基化的脂质体及其制备方法及应用，属于纳米材料及生物化学领域。

背景技术

脂质体有生物兼容性，生物降解能力，表面性质易调整，改变药代动力学，持续释放，有能力克服多药耐药，增强药物稳定性，靶向特定组织的特点，使其成为在许多疾病治疗中最有前景的生物材料之一。脂质体包裹阿霉素（DOX）作为第一款被FDA批准的药物，目前已有超过12款材料应用到临床中。

为了提高脂质体的临床应用性，需要对脂质体做一些特定的功能基化。比如：用抗体修饰脂质体，来提高脂质体的靶向性。可直接利用抗体自身的化学官能团或利用具有活性反应基团的偶联剂对抗体上的基团进行修饰，再偶联到磷脂分子的官能团上。而抗体的提纯较为复杂，成本较高，这也造成脂质体临床应用的成本较高。

多肽分子是人机体内重要的具有生物活性的一类物质，多肽分子通常具有较低的分子量(约1 kDa) ，因此有良好的组织穿透能力，此外还具有靶向性和良好的生物相容性,能作为靶向配体应用于药物递送领域从而达到肿瘤的靶向治疗。目前脂质体功能基化的方法大都集中在将已具备生物功能的多肽的化学基团直接修饰到脂质体上，实现脂质体多功能性。最常用的便是介导细胞与细胞外基质或者细胞间粘附作用的RGD多肽以及细胞穿透肽CPP。目前尚无采用多肽插入脂双层通过对多肽构象调控实现脂质体功能化的方法。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种功能基化的脂质体。

本发明的目的之二在于提供该脂质体的制备方法。

本发明的目的之三在于提供该脂质体在制备溶菌酶人工抗体药物中的应用。

本发明的目的之四在于提供该脂质体在制备癌症抗体靶向药物中的应用。

实现本发明所述目的，本发明将磷脂和多肽通过偶联和置换反应形成磷脂-多肽偶联物，通过核磁表征验证产物化学结构。将合成的磷脂-多肽偶联物与胆固醇，磷脂和磷脂-PEG按配比制备脂质体，其中磷脂-多肽偶联物组分占磷脂质量比例为1%～10%，多肽在脂质体表面形成环状结构。

一种功能基化的脂质体，其特征在于该脂质体是先将多肽通过化学反应连接在磷脂分子上，然后将该磷脂-多肽偶联物与磷脂，胆固醇通过水化薄膜方法组成脂质体。

一种制备上述的功能基化的脂质体的方法，其特征在于该方法的具体给步骤如下：

a.将磷脂去盐酸化后在氯仿中与氮-琥珀星氩氨-3(2-吡啶二硫代)-酸酯等摩尔比混合，反应三天后，加入氯仿、甲醇与超纯水的体积比为65：35：8的混合溶剂，再加入与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺DSPE摩尔数比例为1:2的多肽，反应三天后，旋蒸去除氯仿和甲醇，再加入水，透析两天，冻干，即得到多肽-磷脂聚合物；

b.将步骤a所得多肽-磷脂聚合物、聚乙二醇化二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺DSPE-PEG2000、胆固醇和氢化大豆磷脂按照多肽：磷脂的摩尔比例为3%-5%溶于氯仿中，旋蒸除去氯仿，加入水，马上在温度为50⁰C下水化20分钟，温度为50⁰C下超声10-20分钟，用100nm的膜挤推，得到功能基化的脂质体。

上述的多肽的序列为CGSTIYASYYESGHGC、 CGSTIYASYYESGHG或CYTYGISHGGSASYEC。

上述的功能基化的脂质体在制备溶菌酶人工抗体药物中的应用。