[发明专利]一种体外活化小鼠T淋巴细胞的方法

权利要求书

1.一种体外活化小鼠T淋巴细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：

A.获取小鼠脾脏、外周淋巴结、粘膜上皮或外周血的淋巴细胞；

B.选出CD3ε+淋巴细胞，并检测其纯度；

C.用具有生物活性的抗小鼠CD3ε和CD28两种抗体包被48孔细胞培养板；

D.将步骤C所得的细胞培养板中加入活化T淋巴细胞的培养基重悬细胞；

E.将步骤D所得细胞板在CO₂培养箱培养8～12小时。

2.根据权利要求1所述的活化小鼠T淋巴细胞的方法，其特征在于，所述步骤A中小鼠脾脏、外周淋巴结或粘膜上皮的获取与处理的方法为：将6～10周龄的清洁级小鼠，断颈处死，用体积分数为70～85％的酒精溶液浸泡3～10分钟；无菌取出脾脏、外周淋巴结或粘膜上皮，将其置于直径为10cm的培养皿中，所述培养皿中包括18mL磷酸盐缓冲液和2mL胎牛血清。

3.根据权利要求1所述的活化小鼠T淋巴细胞的方法，其特征在于，所述步骤B中选用磁珠法筛选CD3ε+淋巴细胞，所述检测为流式细胞检测法。

4.根据权利要求1所述的活化小鼠T淋巴细胞的方法，其特征在于，所述步骤C中用于包被48孔细胞培养板所用的抗小鼠CD3ε和CD28两种抗体混合液的浓度分别为10μg/mL和2μg/mL，用pH值为7.6的磷酸盐缓冲液，现配现用，配制好后每孔加入100μL抗体混合液。

5.根据权利要求4所述的活化小鼠T淋巴细胞的方法，其特征在于，所述抗小鼠CD3ε和CD28两种抗体混合液包被48孔细胞培养板后盖上培养板盖子，晃动培养板，使抗体混合液均匀覆盖培养板细胞培养孔内底部。

6.根据权利要求1所述的活化小鼠T淋巴细胞的方法，其特征在于，所述步骤D中细胞接种的48孔板，接种的细胞悬液的浓度为1*10⁶/mL，每孔接种500μL细胞悬液。

7.根据权利要求1所述的活化小鼠T淋巴细胞的方法，其特征在于，所述步骤D中活化T淋巴细胞培养基以RPMI-1640为基础，添加如下成分，以达到如下浓度：体积分数为10％胎牛血清，1*10⁴μmol/L的4-羟乙基哌嗪乙磺酸，20μmol/L的L-谷氨酰胺，10μmol/L的丙酮酸钠，1μmol/L的非必需氨基酸溶液，50μmol/L的β-巯基乙醇和1*10⁵单位/L的重组小鼠白介素-2蛋白。