[发明专利]一种体外活化小鼠T淋巴细胞的方法

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种体外活化小鼠T淋巴细胞的方法，具体包括如下步骤：A.获取小鼠脾脏、外周淋巴结、粘膜上皮或外周血的淋巴细胞；B.筛选出CD3ε+淋巴细胞，并检测其纯度；C.用具有生物活性的抗小鼠CD3ε和CD28两种抗体包被48孔细胞培养板；D.将步骤C所得的细胞培养板中加入活化T淋巴细胞的培养基重悬细胞；E.将步骤D所得细胞板在CO₂培养箱培养8～12小时。该方法可以在短时间内使T淋巴细胞的活化率达到90％以上，对于后续T淋巴细胞在多种生物学功能方面的研究具有重要的意义。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种体外活化小鼠T淋巴细胞的方法。

背景技术

T淋巴细胞来源于骨髓的多功能干细胞(胚胎期来源于卵黄囊和肝)，在人体胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多功能干细胞或前T细胞迁移到胸腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的T细胞。成熟的T细胞经血流分布至外周免疫器官的胸腺依赖区定居，并可经淋巴管、外周血和组织液等进行再循环，发挥细胞免疫及免疫调节等功能。T细胞的再循环有利于广泛接触进入体内的抗原物质，加强免疫应答，较长期保持免疫记忆。T细胞的细胞膜上有许多不同的标志，主要是表面抗原和表面受体。这些表面标志都是结合在细胞膜上的巨蛋白分子。

“T细胞活化技术”，是将患者血液抽出体外，在实验室中进行扩增和激活，增多T细胞数量，增强T细胞活性。例如：对于肝病的治疗，是将患者的血液抽出体外，在实验室中进行扩增和激活，T细胞数量会成千上万的增加，活性增强，杀灭病毒的能力得到大幅度提升，在快递提升T细胞功能的同时该技术可以同时裂解和损毁抽出体外血液中的肝病毒的外壳层中的表面抗原蛋白、内壳层中的核心抗原蛋白和核心的双链DNA，将这些变性坏死的病毒成分成为新的抗原，促使患者机体产生针对乙肝病毒的特异性抗体。最后将这些含有超大数量、超高活性的T细胞和变性坏死病毒成分抗原回输回患者体内，进一步激活全身的体液免疫和细胞免疫系统(T细胞更大范围的激活和扩增，B细胞也被激活并持续产生针对肝炎病毒的抗体)。这些细胞和抗体，持续性追踪和杀伤乙肝病毒，直至清除干净，坏死的病毒成分逐渐被吞噬细胞清除干净，逐渐恢复肝脏功能。

T淋巴细胞具有多种生物学功能，例如杀伤靶细胞，辅助或抑制B细胞产生抗体，对特异性抗原和促有丝分裂原的应答反应以及产生细胞因子等，对身体抵御疾病感染、肿瘤具有重要作用。

T细胞在其他抗肿瘤免疫中同样具有十分重要的作用，也是目前的研究热点，目前主要是应用小鼠的T淋巴细胞作为研究对象。但是，现有技术中单纯的T细胞活化需要20～48小时，活化需要的时间过长，活化率也并不是很高。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明要解决的技术问题是提供一种体外活化小鼠T淋巴细胞的方法，该方法能够加快T细胞活化速度，同时，还能够提高T细胞活化比率。

为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：

一种体外活化小鼠T淋巴细胞的方法，具体包括如下步骤：

A.获取小鼠脾脏、外周淋巴结、粘膜上皮或外周血；

B.将小鼠脾脏、外周淋巴结或粘膜上皮研磨至匀浆，外周血则无需处理；

C.过滤并离心收集单细胞悬液，外周血则无需处理；

D.去除红细胞；

E.磷酸盐缓冲液重悬细胞

F.分选出CD3ε+淋巴细胞，并检测其纯度；

G.用具有生物活性的抗小鼠CD3ε和CD28两种抗体包被48孔细胞培养板,孵育8～11小时后弃去抗体混合液；

H.将步骤G所得的细胞培养板中加入活化T淋巴细胞的培养基重悬细胞；