[发明专利]递送融合型RNA结合蛋白的表达载体及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201810632885.5 | 申请日： | 2018-06-20 |
| 公开（公告）号： | CN108753822A | 公开（公告）日： | 2018-11-06 |
| 发明（设计）人： | 袁丽君;李者龙;杨国栋;周雪莹;赵联璧 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/62;C12N15/66;C12N5/10;A61K47/46 |
| 代理公司： | 郑州浩翔专利代理事务所(特殊普通合伙) 41149 | 代理人： | 靳锦;边延松 |
| 地址： | 710000 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 递送 表达载体 融合型 制备 蛋白 制备方法和应用 药物递送载体 结构域序列 包装病毒 包装细胞 包装质粒 病毒感染 蛋白序列 疾病治疗 共转染 全序列 溶酶体 创建 改造 应用 | ||
1.一种递送融合型RNA结合蛋白的表达载体，其特征在于，所述表达载体包括引导蛋白序列和RNA结合蛋白序列；所述引导蛋白为能够定位于外泌体和/或溶酶体的引导蛋白；所述RNA结合蛋白序列包括RNA结合蛋白全序列或RNA结合蛋白结构域序列。
2.根据权利要求1所述的递送融合型RNA结合蛋白的表达载体，其特征在于，所述融合蛋白中引导蛋白为溶酶体相关膜蛋白。
3.根据权利要求1所述的递送融合型RNA结合蛋白的表达载体，其特征在于，所述RNA结合蛋白为人抗原R。
4.一种权利要求1所述的递送融合型RNA结合蛋白的表达载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）Trizol提取小鼠成纤维细胞总RNA；
（2）利用Promega M-MLV反转录酶对RNA进行反转录得小鼠成纤维细胞cDNA；
（3）以反转录cDNA为模板，扩增融合蛋白和RNA结合蛋白目的条带；
（4）将目的条带用限制性内切酶酶切连入表达载体，即得。
5.一种含权利要求1所述的递送融合型RNA结合蛋白的表达载体的外泌体，其特征在于，所述外泌体的制备方法为：将所述载体与包装质粒一起共转染HEK293T细胞包装病毒，将所得病毒感染外泌体包装细胞，收集包装细胞分泌的外泌体即得。
6.根据权利要求5所述的外泌体，其特征在于，所述包装质粒为psPAX2和/或pMD2.G。
7.权利要求1所述表达载体或权利要求5所述外泌体在药物递送载体中的应用。
8.权利要求1所述表达载体或权利要求5所述外泌体在RNA调控的相关疾病治疗中的应用。
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