[发明专利]通用型靶向CD19抗原嵌合受体T细胞的制备及其应用

说明书

本发明涉及通用型靶向CD19抗原嵌合受体T细胞的制备及其应用。本发明具体涉及一种制备靶向CD19抗原嵌合受体T细胞的方法，所述方法包括将基因编辑物质递送至T细胞以剪切TRAC和B2M基因；和将靶向CD19 CAR和B2M‑HLA‑E融合基因克隆至修复模板载体中以同时向T细胞导入靶向CD19 CAR和B2M‑HLA‑E融合基因同源重组修复模板。所述通用型靶向CD19抗原嵌合受体T细胞具有异体移植排斥反应小、产量高、安全性高、即时可用和适用范围广等优点。

技术领域

本发明涉及细胞治疗领域，特别涉及包括通用型靶向CD19抗原嵌合受体T细胞的细胞治疗领域。

背景技术

CAR-T治疗

传统肿瘤治疗药物包括化疗药、靶向药，虽然它们在一定程度上提高了癌症患者的生存期，但同时也带来了严重的副作用，极大地降低了病人的生存质量。更不幸的是，大部分患者在接受这些传统治疗后仍旧会复发，而一旦复发，无药可救是大概率事件。

近年来，随着免疫治疗的发展，免疫检验点抑制剂药物(如CTLA-4、PD-1/PD-L1抗体)的出现，彻底改变了肿瘤治疗的方式。但这类药物在不同癌症病人中的有效率只有20％-40％，仍然有大部分的癌症患者等待新的有效治疗方式的出现。

嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)治疗技术是通过体外转导一个识别癌细胞的人工基因于人体T细胞上，使人T细胞具有特异杀伤肿瘤细胞的能力。CAR-T细胞治疗属于过继性免疫疗法(adoptive cell transfer，ACT)，它利用人体免疫细胞来对抗肿瘤，被称为“活体药物”。这种ACT疗法在近年已应用于临床实验当中，特别是在儿童白血病方面的有效探索，为研究者以及医生开辟了一条治疗肿瘤的新路径。2017年末，两款CAR-T药物获得美国FDA的许可上市，这种ACT疗法与传统药物相比具有如下创新点：

首先，精确靶向肿瘤，且副作用可逆。CAR-T细胞治疗相比化疗药、靶向药具有更特异的肿瘤细胞杀伤能力。在输入病人体内后，虽然短时间内会产生细胞因子效应，但该副反应可控，病人在获得完全缓解的情况下基本上能和健康人一样生活。

其次，持续缓解时间长。CAR-T细胞部分属于记忆T细胞，在输入病人体内后能长期存在于病人身体中，时刻监视身体中是否出现肿瘤细胞，一旦有新的肿瘤细胞出现就会立刻将其杀灭。

其中，靶向CD19 CAR-T细胞治疗已在临床实验阶段被用于复发难治的急性淋巴白血病、慢行淋巴白血病、非霍奇金淋巴瘤，也有见报道称用于多发性骨髓瘤。在上述适应症中，靶向CD19 CAR-T取得了极高的完全缓解率，特别是在急性淋巴白血病中取得了超过80％的完全缓解率。在靶向CD19 CAR-T治疗中也出现了一些问题：首先是短时间副作用大，主要是细胞因子风暴和神经毒性，超过一半的病人都有不同程度的上述副作用；其次是复发问题，据不同研究结果分析，有超过一半的病人在经过靶向CD19 CAR-T细胞治疗一年后会复发，复发的原因包括肿瘤抗原逃逸和输入CAR-T细胞耗竭等。

虽然，自体CAR-T在我国已如火如荼地进行着临床研究以及产业化的进程，但因特殊的技术特点，其在商业化的道路上仍有一些障碍：

首先，价格高昂。“私人订制”式的生产导致高昂的价格，诺华上市的CD19 CAR-T细胞制品Kymirah售价高达47.5万美金，风筝制药上市的Yescarta售价34.7万美金，对于中国患者是难以承受的负担。

其次，订制时间长。订制式的CAR-T细胞需要15～20天的培养时间，对于晚期恶性肿瘤患者，病情紧急，无法及时给药，病人可能在药品制备的等待中去世。

再次，具有使用限制自体CAR-T的制备非常依赖于病人自身的T细胞状态，往往对于经过多次化疗的病人，其T细胞并不适合用来制作CAR-T，其使用受到限制。据不完全统计，有10％左右的血液肿瘤患者其T细胞不具备订制自体CAR-T的条件，因此无法使用。