[发明专利]一种水貂源D型绿脓杆菌及其应用、其灭活疫苗以及该灭活疫苗的制备方法

权利要求书

1.一种水貂源D型铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）LN17-D ，其保藏编号为CGMCC NO.15426。

2.一种水貂源D型绿脓杆菌灭活疫苗，其特征在于，所述灭活疫苗含有灭活后的权利要求1所述的水貂源D型铜绿假单胞菌LN17-D。

3.权利要求2所述的水貂源D型绿脓杆菌灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）铜绿假单胞菌LN17-D菌株种子批制备：将铜绿假单胞菌LN17-D菌种F8代，接种于PYG琼脂培养基中，经培养获得F9代，将F9 代接种于PYG琼脂斜面培养基，经培养获得一级种子，即F10代，取一级种子接种于PYG液体培养基中，经培养获得F11代，将F11代接种于PYG液体培养基中，经培养获得二级种子液；

2）制苗用菌液的制备：将步骤1)获得的二级种子液接种于PYG液体培养基中获得铜绿假单胞菌LN17-D制苗菌液；

3）菌液灭活：向步骤2）获得的铜绿假单胞菌LN17-D制苗菌液中加入甲醛溶液将菌株灭活；

4）疫苗的配制：向菌液中加入氢氧化铝胶、硫柳汞混合后制备获得水貂源D型绿脓杆菌灭活疫苗。

4.根据权利要求3所述的水貂源D型绿脓杆菌灭活疫苗的制备方法，其特征在于，步骤1）中所述获得F9代的培养条件为36～37℃培养18～24小时；获得一级种子的培养条件为36～37℃培养18～24小时；获得F11代的培养条件为36～37℃，180r/min振摇12小时；所述F11代按照3%的体积比接种于PYG液体培养基，37℃ 180r/min振摇12小时，获得二级种子。

5.根据权利要求3所述的水貂源D型绿脓杆菌灭活疫苗的制备方法，其特征在于，步骤2）所述的二级种子液以5%的体积比例接种于PYG液体培养基中，37℃通气培养12小时，获得制苗菌液。

6.根据权利要求3所述的水貂源D型绿脓杆菌灭活疫苗的制备方法，其特征在于，步骤3）所述的灭活是指向铜绿假单胞菌LN17-D株的菌液总量中加入菌液体积总量0.18%的甲醛溶液，37℃下搅拌灭活24小时，所述甲醛溶液为质量分数为35%～40%的甲醛水溶液。

7.根据权利要求3所述的水貂源D型绿脓杆菌灭活疫苗的制备方法，其特征在于，步骤4）所述氢氧化铝胶在灭活疫苗中的终浓度为5%质量含量，硫柳汞在灭活疫苗中的终浓度为0.005%质量含量。

8.权利要求1所述的水貂源D型铜绿假单胞菌LN17-D在制备水貂源D型绿脓杆菌灭活疫苗中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，是将水貂源D型铜绿假单胞菌LN17-D经培养后灭活，然后加入铝胶佐剂制备水貂源D型绿脓杆菌灭活疫苗。