[发明专利]一种水貂源D型绿脓杆菌及其应用、其灭活疫苗以及该灭活疫苗的制备方法

说明书

一种水貂源D型绿脓杆菌及其应用、其灭活疫苗以及该灭活疫苗的制备方法，属于疫苗制备技术领域。针对目前缺少预防水貂假单胞菌肺炎的特定血清型疫苗的问题，本发明提供了一种水貂源D型绿脓杆菌LN17‑D株，其保藏编号为CGMCC NO.15426；所述水貂源D型绿脓杆菌LN17‑D经培养后灭活，然后加入铝胶佐剂可制备水貂源D型绿脓杆菌灭活疫苗。本发明适用于水貂源D型绿脓杆菌灭活疫苗的生产。

技术领域

本发明涉及疫苗制备技术领域，具体涉及一种水貂源D型绿脓杆菌及其应用、其灭活疫苗以及该灭活疫苗的制备方法。

背景技术

水貂假单胞菌肺炎又名水貂出血性肺炎，是主要发生在每年9-11月份水貂换毛季节的急性传染病，具有发病急，出血性肺炎、死前呼吸困难，鼻孔流出鲜红血液，剖检可见肺部弥漫性出血，败血症，一旦发病，可造成10％～50％的死亡率，是危害水貂养殖的重要细菌性传染病。假单胞菌即绿脓杆菌是引起水貂出血性肺炎的病原，因其包含多种血清型，同时各型间交叉保护的效果不好，同时，该病发病急，抗生素治疗往往来不及，因此，开发针对某一特定血清型的疫苗是预防该病的有效手段。

发明内容

针对目前缺少预防水貂假单胞菌肺炎的特定血清型疫苗的问题，本发明提供了一种水貂源D型绿脓杆菌，所述水貂源D型绿脓杆菌为水貂源D型绿脓杆菌LN17-D，其保藏编号为CGMCC NO.15426。

本发明还提供了一种水貂源D型绿脓杆菌灭活疫苗，所述灭活疫苗含有灭活后的水貂源D型绿脓杆菌LN17-D。

所述的水貂源D型绿脓杆菌灭活疫苗的制备方法，包括如下步骤：

1)绿脓杆菌LN17-D菌株种子批制备：将绿脓杆菌LN17-D菌种F8代，接种于PYG琼脂培养基中，经培养获得F9代，将F9代接种于PYG琼脂斜面培养基，经培养获得一级种子，即F10代，取一级种子接种于PYG液体培养基中，经培养获得F11代，将F11代接种于PYG液体培养基中，经培养获得二级种子液；

2)制苗用菌液的制备：将步骤1)获得的二级种子液接种于PYG液体培养基中获得绿脓杆菌LN17-D制苗菌液；

3)菌液灭活：向步骤2)获得的绿脓杆菌LN17-D制苗菌液中加入甲醛溶液将菌株灭活；

4)疫苗的配制：向菌液中加入氢氧化铝胶、硫柳汞混合后制备获得水貂源D型绿脓杆菌灭活疫苗。

优选地，步骤1)中所述获得F9代的培养条件为36～37℃培养18～24小时；获得一级种子的培养条件为36～37℃培养18～24小时；获得F11代的培养条件为36～37℃，180r/min振摇12小时；所述F11代按照3％的体积比接种于PYG液体培养基，37℃180r/min振摇12小时，获得二级种子。

优选地，步骤2)所述的二级种子液以5％的体积比例接种于PYG液体培养基中，37℃通气培养12小时，获得制苗菌液。

优选地，步骤3)所述的灭活是指向绿脓杆菌LN17-D株的菌液总量中加入菌液体积总量0.18％的甲醛溶液，37℃下搅拌灭活24小时，所述甲醛溶液为35％～40％的甲醛水溶液。

优选地，步骤4)所述氢氧化铝胶在灭活疫苗中的终浓度为5％质量含量，硫柳汞在灭活疫苗中的终浓度为0.005％质量含量。

本发明提供了所述水貂源D型绿脓杆菌LN17-D在制备水貂源D型绿脓杆菌灭活疫苗中的应用，是将水貂源D型绿脓杆菌LN17-D经培养后灭活，然后加入铝胶佐剂制备水貂源D型绿脓杆菌灭活疫苗。

有益效果

本发明制备的水貂源D型绿脓杆菌灭活疫苗对免疫动物具有良好的安全性，免疫后可产生理想的针对D型绿脓杆菌的免疫效果，因此，本发明在防治水貂绿脓杆菌肺炎领域将具有广阔的应用前景。

具体实施方式