[发明专利]一种利拉鲁肽的固相合成方法

权利要求书

1.一种利拉鲁肽的固相合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、在树脂载体A上采用固相合成法制备全保护多肽片段I肽树脂、全保护多肽片段II肽树脂、全保护多肽片段III肽树脂、全保护多肽片段IV肽树脂；

步骤2、用裂解液分别酸解全保护多肽片段I肽树脂、全保护多肽片段II肽树脂、全保护多肽片段III肽树脂、全保护多肽片段IV肽树脂得到全保护多肽片段I、全保护多肽片段II、全保护多肽片段III、全保护多肽片段IV；

步骤3、在树脂载体B上通过固相合成法按照利拉鲁肽的序列顺序从C端开始依次耦合相应的保护氨基酸和全保护多肽片段，制备全保护利拉鲁肽肽树脂：

Boc-His(Trt)-I-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Ser(tBu)-Ser

(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-II-III-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-IV-Arg(Pbf)-Gly-树脂；

步骤4、用裂解液酸解全保护利拉鲁肽肽树脂，得利拉鲁肽粗品，即：

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-

Ala-Lys(Nα-PAL-γ-Glu)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH；

步骤5、利拉鲁肽粗品纯化得利拉鲁肽精制品；

其中所述的全保护多肽片段I为Fmoc-Ala-Glu(OtBu)-Gly-OH，全保护多肽片段II为Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-OH，全保护多肽片段III为Fmoc-Ala-Lys-(Glu(Nα-Palmitoyl)-OtBu)-Glu(OtBu)-OH，全保护多肽片段IV为Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Gly-OH。

2.根据权利要求1所述利拉鲁肽的固相合成方法，其特征在于：步骤1中树脂载体A为2-氯三苯基甲基树脂。

3.根据权利要求1所述利拉鲁肽的固相合成方法，其特征在于：步骤2中裂解液为含体积分数1 .5％～3 .0％TFA的DCM溶液。

4.根据权利要求1所述利拉鲁肽的固相合成方法，其特征在于：裂解完毕，以同等体积的吡啶/二氯甲烷溶液中和裂解液，其中吡啶的体积含量与裂解液中TFA的体积含量相同。

5.根据权利要求1所述利拉鲁肽的固相合成方法，其特征在于：步骤2中全保护多肽片段肽树脂与裂解液的质量体积比为1：6～8，其中质量以g计，体积以mL计。

6.根据权利要求1所述利拉鲁肽的固相合成方法，其特征在于：步骤3中树脂载体B选自2-氯三苯基甲基树脂或wang树脂。

7.根据权利要求1所述利拉鲁肽的固相合成方法，其特征在于：步骤4中全保护利拉鲁肽肽树脂与裂解液的质量体积比为1：6～8，其中质量以g计，体积以mL计。

8.根据权利要求1所述利拉鲁肽的固相合成方法，其特征在于：步骤4中当树脂载体B为2-氯三苯基甲基树脂时，酸解采用低-高酸两步裂解法，低酸裂解液为含3％～5％TFA的DCM溶液；以v:v:v:m计，高酸裂解液为TFA：H2O：TIS：DTT＝90：2 .5：3 .5：4的溶液，其中体积以mL计，质量以g计。

9.根据权利要求1所述利拉鲁肽的固相合成方法，其特征在于：步骤4中当树脂载体B为wang树脂时，采用一步裂解法，以v:v:v:m计，裂解液为TFA：H2O：TIS：DTT＝90：2 .5：3 .5：4的溶液，其中体积以mL计，质量以g计。