[发明专利]一种利拉鲁肽的固相合成方法

说明书

本发明属于多肽药物制备方法技术领域，特别涉及利拉鲁肽的制备方法。包括以下步骤：采用固相多肽合成法制备全保护多肽片段I‑IV，按照利拉鲁肽的序列顺序从C端开始依次耦合相应的保护氨基酸和全保护多肽片段得到全保护利拉鲁肽肽树脂，再用裂解液酸解全保护利拉鲁肽肽树脂得利拉鲁肽粗品，最后纯化得利拉鲁肽精制品。本发明解决了困难氨基酸难耦合的难题，有效避免与利拉鲁肽极性相近杂质的产生，降低了利拉鲁肽合成和纯化难度，提高了利拉鲁肽的纯度和收率，利于工业化生产。

技术领域

本发明属于医药合成领域，具体涉及一种利拉鲁肽的固相合成方法。

背景技术

利拉鲁肽，英文名liraglutide，是一种胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物，序列为H-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(N-ε-(N-ɑ-Palmitoyl-L-γ-glutamyl))-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH，

分子式：C172H265N43O51，作为一种皮下注射制剂，能起到良好的降低血糖作用，能够通过降低2型糖尿病患者的空腹及餐后血糖而改善血糖控制，同时能够降低患者体重。

目前利拉鲁肽的合成方法如专利CN103087181、专利CN 102286092、专利CN103145828、文献J.Med.Chem.2000,43,1664-1669、文献Chin.J.Org.Chem.2016,36,218-221和文献Chinese Journal of Pharmaceuticals 2013,44(2),121-124是利用Fmoc策略固相法依次连接合成利拉鲁肽直链多肽，然后脱去Lys支链保护基，修饰Lys支链氨基得到利拉鲁肽肽树脂。该方法依次合成利拉鲁肽直链时，容易产生与利拉鲁肽极性相近的残缺肽，导致纯化困难。再者，此方法在利拉鲁肽直链合成完毕再修饰Lys支链氨基，由于Lys支链的高空间位阻，容易导致反应不完全或过反应，产生缺陷肽，总收率较低，同时杂质较多，纯化困难。

专利CN102875665、专利CN104045705和专利CN103864918采用固相片段缩合的方法合成，固相片段缩合投入的每个片段都是1.5～3.5倍过量，严重浪费肽片段，合成成本很高；同时由于固相片段缩合的树脂取代值限制，物料通量降低，浪费溶剂，产生大量废液。

专利CN103275208和专利CN103304659首先合成多肽片段，再按照利拉鲁肽的氨基酸序列逐步偶联剩余氨基酸制得利拉鲁肽肽树脂，修饰Lys支链氨基是在利拉鲁肽肽树脂上进行，易导致反应不完全或过反应，产生缺陷肽，总收率较低，同时杂质较多，纯化困难，且专利CN103304659合成的多肽片段序列过长，还存在溶解困难、难以耦合的问题。

专利CN104650219采用液相片段缩合的方法合成全保护利拉鲁肽直链多肽，然后在液相反应体系中经历四步反应得到全保护利拉鲁肽粗品，后处理繁琐，不利于工业化生产，并且Lys支链氨基的修饰在全保护利拉鲁肽直链多肽上进行，空间位阻大、溶解度低、反应困难，容易产生缺陷肽，造成物料浪费。

专利CN103980358首先通过液相合成片段Fmoc-Lys-(Glu(N^α-Palmitoyl)-OtBu)-OH，然后采用固相合成法逐个耦合氨基酸制备利拉鲁肽，无需在利拉鲁肽直链上修饰Lys支链氨基。但该方法容易产生与利拉鲁肽极性相近的残缺肽，导致纯化困难，单一杂质含量高。

其他专利公开了基因重组生产利拉鲁肽，然而基因表达有着工作量大、三废严重、技术难度大、生产成本高等缺点。

发明内容