[发明专利]一种UPCC法测定维生素D2注射液中维生素D2含量的方法

说明书

本发明公开了一种快速测定维生素D2注射液中维生素D2含量的色谱方法，运用超高效合相色谱法，通过对色谱条件的巧妙优化，最终达到快速而准确地对复杂组分样品中维生素D2含量的测定。该色谱方法包括以下步骤：(1)系统适用性溶液的制备；(2)对照品溶液的制备；(3)供试品溶液的制备。并利用维生素D2的标准曲线来计算维生素D2注射液中维生素D2的含量。本发明能在15min内快速分离并准确测定维生素D2的含量，方法具有良好的专属性和线性关系、准确度高、检测速度快、灵敏度高、再现性好、环保等优点。

技术领域

本发明涉及一种运用超高效合相色谱法(UPCC)测定维生素D2注射液中维生素D2含量的方法，运用超临界CO₂作为流动相并对色谱条件进行巧妙优化，最终快速而准确地测定维生素D2注射液中维生素D2的含量。

背景技术

维生素D2注射液临床上用于维生素D缺乏症的预防和治疗、慢性低钙血症、低磷血症、佝偻病及伴有慢性肾功能不全的骨软化症、家族性低磷血症及甲状旁腺功能低下的治疗和用于治疗急慢性及潜在手术后手足搐搦症及特发性手足搐搦症。

对维生素D2注射液中维生素D2含量的测定方法，现为2015版中国药典四部通则0722维生素D测定法第一法，该法采用正相色谱，系统适用性试验、对照品的制备、混合对照品的制备过程十分繁琐，均需要经过水浴加热和通氮等处理，且计算过程复杂、结果误差大、重现性差、流动相采用大量有机溶剂对环境造成污染，浪费大量的人力、物力和时间。

超高效合相色谱仪突破了液相色谱和气相色谱分离的局限，主要的流动相为超临界CO₂，与液体流动相或载气相比，降低了成本和毒性，并具有溶剂载量少、分离度高、峰形窄、选择性高、分离快速等优点。与现行法定标准的正相色谱法相比，大大减少了有毒有害有机试剂的使用，并节约了成本，体现了绿色检验和检验经济学的理念。

发明内容

本发明的目的是提供一种测定维生素D2注射液中维生素D2含量的方法，是直接采用超高效合相色谱法测定维生素D2的含量，结果专属性和线性良好，本发明简便、准确和快捷，安全且环保。

本发明的技术解决方案是：在确保系统适用性通过的前提下，先使待测样品溶解，令待测样品中维生素D2的浓度能达到检测线性范围，然后用超高效合相色谱法测定维生素D2注射液中维生素D2的含量，包括以下步骤：

(1)将维生素D2和维生素D3对照品分别用正己烷溶解，并分别配制成浓度均为0.25mg/ml的溶液，制成维生素D2和维生素D3对照品标准储备溶液待用；

(2)将维生素D2注射液用正己烷溶解，配制成浓度为25μg/ml的溶液，过滤，制成供试品溶液待用；

(3)分别取步骤(1)配制的维生素D2、维生素D3对照品标准储备溶液，加正己烷稀释制成维生素D2和维生素D3浓度均为25μg/ml的混合对照品标准溶液，作为系统适用性溶液；使用超高效合相色谱仪分析，并得到维生素D2与维生素D3的分离度；

(4)取步骤(1)的维生素D2对照品标准储备溶液，配制成梯度浓度的标准溶液；使用超高效合相色谱仪分析，并根据得到的色谱绘制维生素D2峰面积与浓度的标准曲线；

(5)在步骤(4)的相同液相色谱条件下检测步骤(2)制得的供试品溶液，再利用步骤(4)得到的维生素D2峰面积与浓度的标准曲线来计算维生素D2的含量。

其中，步骤(3)系统适用性溶液得到的色谱图中，维生素D2与维生素D3的分离度大于1.5。

在步骤(3)(4)(5)的色谱系统中，所述的流动相为超临界CO₂，改性剂为四氢呋喃。

优选地，超临界CO₂与四氢呋喃的体积比为95∶5。