[发明专利]大肠杆菌O157的多重PCR检测引物及检测方法在审
| 申请号： | 201810641312.9 | 申请日： | 2018-06-21 |
| 公开（公告）号： | CN108950029A | 公开（公告）日： | 2018-12-07 |
| 发明（设计）人： | 颜世敢;朱丽萍 | 申请（专利权）人： | 齐鲁工业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/10;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 250353 山东省济南*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌O157 多重PCR检测 引物 检测引物 检测 大肠杆菌 退火 空白对照 扩增循环 阳性对照 阴性对照 对引物 预变性 变性 扩增 灵敏 延伸 | ||
1.大肠杆菌O157的多重PCR检测引物及检测方法，其特征在于包括3对引物，引物序列如下：
rfbE上游引物F1：5’-CGTAAGAGGGACCGTAGA-3’(SEQ ID No.1)，
rfbE下游引物F2：5’-TGGCTGGATTATCGTTTG-3’(SEQ ID No.2)，
fliC上游引物F3：5’-GCTGTCGAGTTCTATCGAG-3’(SEQ ID No.3)，
fliC下游引物F4：5’-GTGACTTTATCGCCATTCC-3’(SEQ ID No.4)，
stx1上游引物F5：5’-ACGAGGGCTTGATGTCTA-3’(SEQ ID No.5)，
stx1下游引物F6：5’-GTAAGGCTTCTGCTGTGA-3’(SEQ ID No.6)。
2.根据权利要求1所述的多重PCR检测方法，其特征在于每25μL PCR反应体系中含有以下组分：10×PCRbuffer 2.5ul，25mmol/LMgCl20.25-1.5μL，Taq DNA聚合酶1.25U，2.5mmol/L dNTPs 2ul，DNA模版1-2ul，上下游引物各0.5-1ul，灭菌双蒸水补足体积至25ul，设阳性对照、阴性对照和空白对照(蒸馏水)，将上述PCR反应液添加到反应管中，置PCR仪中进行扩增，扩增程序为94℃变性5min，然后94℃预变性30s，48-52℃退火30s，72℃延长45s，共扩增30-35个循环，最后72℃延伸5min，反应结束后取PCR产物，在1-2％的琼脂糖凝胶上电泳，电泳结束后将凝胶置紫外成像仪中观察结果。
3.根据权利要求1所述的检测引物和检测方法，其特征在于在检测临床样品里存在的大肠杆菌O157中的应用。
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