[发明专利]一种用于检测猪五种繁殖障碍性病毒病基因芯片的制备及其应用方法

说明书

本发明公开了一种用于检测猪五种繁殖障碍性病毒病基因芯片的制备及其应用方法，该方法为实现多样本的繁殖障碍性病毒病一次性筛查检测奠定了基础，同时有效解决了传统方法费时费力、敏感性低、投入大的缺陷。本发明的技术方案如下：基于五种病毒的保守序列利用生物学软件设计特异性引物与探针，用TE Buffer溶解合成好的探针，在基因芯片点样仪上按预先设定好的程序在醛基化基片上喷点式点样，制备用于检测猪五种繁殖障碍性病毒病的芯片。本发明的使用方法是：提取待测样品的基因组DNA/RNA，利用多重PCR反应体系制备杂交用PCR产物，与制备好的基因芯片杂交，经洗涤与干燥后，将芯片置于激光共聚焦扫描仪上扫描，分析结果，大大节省了时间，检测成本低。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，更具体地说，它涉及一种用于检测猪五种繁殖障碍性病毒病基因芯片的制备及其应用方法。

背景技术

近年来，随着我国规模化养殖场的不断扩大，密集型的饲养方式大大增加了猪群之间的接触几率，接触几率的增加加快了疾病传播的同时，也使得患病猪常呈现混合感染现象，诸如猪瘟病毒(Swine fever,Hog cholera)、猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)、猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)、日本乙型脑炎(Japanese encephalitis virus,JEV)及猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)及等许多具有相似的临诊症状的猪繁殖障碍疾病发生混合或继发感染，这就加大了临床诊断的难度。因此，建立有效的实验室诊断是十分必要的，其中实验室诊断包括病毒的分离鉴定、血清学检测以及分子生物学技术。但其中的一些方法存在成本高、费时费力、敏感性较低、特异性较差等缺陷，不能实现临床样品的快速鉴别诊断。

基因芯片技术是一种新型并蓬勃发展的微型化、高通量的基因检测及分析技术，其原理是用荧光标记的样品与固定在固相支持物表面的寡核苷酸或探针相杂交，经检测分析杂交信号后，可得到样品的检测结果。基因芯片作为一种先进的、大规模、高通量检测技术可以同时检测多种病毒、多个样品，快速简便且具有高度的灵敏性和准确性。

发明内容

基于我国猪场发病情况，为解决现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种用于检测猪五种繁殖障碍性病毒病(包括CSFV、PPV、PRRSV、JEV及PCV2)联合检测基因芯片的制备及其应用方法，可有效解决现有技术敏感性低、稳定性较差、费时费力等缺点。

本发明的技术方案是：利用生物学软件设计并合成特异性引物与探针，用TEBuffer溶解稀释合成好的探针，利用基因芯片点样仪按电脑预设程序将稀释好的特异性探针喷点固化于醛基化基片(公知市售产品)上，制备用于检测猪五种繁殖障碍性病毒病的基因芯片。

本发明还提供了用于检测猪五种繁殖障碍性病毒病基因芯片的使用方法，该方法主要包括以下步骤：提取待测样品的基因组DNA/RNA，利用多重PCR反应体系制备杂交用PCR产物，与制备好的基因芯片杂交，经洗涤与干燥后，将芯片置于激光共聚焦扫描仪上扫描，分析结果。

本发明操作简便易行，省去了已点样芯片的水化处理和预杂交步骤，杂交只需2h，大大节省了时间，达到了快速检测的目的，采用1μM的探针浓度就可以达到较高的信号强度，降低了检测成本，可用于大规模检测。

综上所述，本发明与现有技术相比具有以下有益效果：。

为更清楚地阐述本发明的结构特征和功效，下面结合附图与具体实施例来对本发明进行详细说明。

附图说明

图1为本发明的基因芯片点样示意图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明的技术方案做进一步的说明。