[发明专利]一种腐生葡萄球菌间接血凝抗体检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种检测腐生葡萄球菌血清抗体的间接血凝试剂盒，以及制备和使用这种试剂盒的方法。所述试剂盒中包括：(1)腐生葡萄球菌间接血凝抗原；(2)标准阳性血清；(3)标准阴性血清；(4)稀释液；并提供了试剂盒的制备和应用方法。本发明提供了一种腐生葡萄球菌间接血凝抗体检测试剂盒及其应用，该试剂盒操作简单方便，适合在各基层兽医有关单位以及养殖场广泛推广使用；本发明中的试剂盒在检测样品时只需简单的仪器耗材，全程在2‑3小时就能完成；结果判定直观，重复性好。能够快速，稳定，准确的检测腐生葡萄球菌的抗体。

技术领域

本发明涉及一种腐生葡萄球菌间接血凝抗体检测试剂盒及其制备方法，属于用于微生物的检测试剂技术领域。

背景技术

腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)属于凝固酶阴性葡萄球菌属，是一种广泛分布在自然界和人体体表的革兰氏阳性球菌，为条件性致病菌，在尿液,生殖道分沁物等感染标本中，都能检出腐生葡萄球菌，具有重要的临床意义。同时，腐生葡萄球菌也是是奶牛隐性乳房炎的主要病原菌，也是希腊香肠、盐水鸭和中国侗族传统发酵肉中常见的菌种。目前国内外对腐生葡萄球菌的研究报道甚少，对于腐生葡萄球菌的分子生物学检测技术主要依靠实验室细菌分离、PCR分子生物学鉴定，对于腐生葡萄球菌的血清抗体检测技术在国内外均未见报道。鉴于此，有必要开发一种可检测腐生葡萄球菌血清抗体的免疫学技术，可满足基层开展对腐生葡萄球菌快速有效的血清学诊断技术，减少对腐生葡萄球菌感染造成的误诊及漏诊，从而对腐生葡萄球菌在畜牧生产中的感染状况进行调查。

发明内容

本发明提供一种操作简单、方便、快速，成本较低，无需专业技术的检测腐生葡萄球菌血清抗体效价的间接血凝试剂盒，以及这种试剂盒的制备方法和使用方法，用来开展腐生葡萄球菌的流行病学调查。

为了实现上述目的，本发明提供一种检测腐生葡萄球菌血清抗体的间接血凝试剂盒，所述试剂盒中包括：

(1)腐生葡萄球菌间接血凝抗原1瓶(10ml)，4℃保存；

(2)标准阳性血清1瓶(0.5ml)，-20℃冻存；

(3)标准阴性血清1瓶(0.5ml)，-20℃冻存；

(4)稀释液3瓶(10ml/瓶)，4℃保存。

进一步的，上述的一种腐生葡萄球菌间接血凝抗体检测试剂盒，可检测40～50份血清，保存期为6个月。

进一步的，上述的一种腐生葡萄球菌间接血凝抗体检测试剂盒，所述腐生葡萄球菌间接血凝抗原是将腐生葡萄球菌菌株CCTCC M 2018117株进行增菌培养后，进行超声破碎，再离心取上清后，作为抗原致敏鞣酸处理过的绵羊红细胞得到的。

进一步的，上述的一种腐生葡萄球菌间接血凝抗体检测试剂盒，所述腐生葡萄球菌间接血凝抗原的制备方法，包括以下步骤：

(1)配制阿氏液：柠檬酸钠0.8克，柠檬酸0.055克，葡萄糖2.05克，氯化钠0.42克，双蒸水100ml。混匀后113℃高压10min，冷却至室温后4℃保存。

(2)配制磷酸盐缓冲液(0.01M，pH7.2)：称取206.21克Na₂HPO₄·12H₂O，30.46克KH₂PO₄，68克NaCl，加去离子水，定容至8000ml，混匀后121℃高压20min，冷却至室温保存。

(3)静脉采集绵羊红细胞100ml，与100ml灭菌阿氏液混匀，在4℃静置5天，使红细胞充分沉淀。将沉淀好的红细胞摇匀，用灭菌纱布过滤，滤出液收集至大离心管中，以4000r/min离心15min，弃去上清。用磷酸盐缓冲液洗涤红细胞4遍。