[发明专利]一种制备刺葡萄两个主要花色苷标准品的方法

权利要求书

1.一种利用高速逆流色谱分离制备刺葡萄汁中花色苷标准品的方法，其中该方法分离制备的花色苷标准品是锦葵素-[3-O-葡萄糖-]-[5-O-葡萄糖]和锦葵素-[3-O-β-葡萄糖基-6-香豆酰]-[5-O-β-D-葡萄糖]，所述方法步骤包括：

高速逆流色谱进样原料的制备方法如下：刺葡萄汁5000r/min转速离心10分钟，取上清液用盐酸调节pH 2-3，以2-2BV/h的流速通过装有60cm×3cm AB-8大孔吸附树脂的层析柱，待树脂吸附完成后，关闭阀门静置半个小时；然后用蒸馏水快速洗柱，至流出的水颜色很浅，再用70%乙醇以3-4BV/h的流速洗柱，接收流出来的红紫色液体，于-50℃减压浓缩冷冻干燥，制得粉即粗样；

高速逆流分离步骤具体为：溶剂体系水、正丁醇、甲基叔丁基醚、乙腈和三氟乙酸按照比例配制后，震摇后静置自然分层，上相作固定相，下相作流动相；将粗样用流动相进行溶解；固定相泵满管路，再泵入流动相；等到有流动相流出时体系平衡，平衡后，停泵，然后进样，开泵，根据图谱分别收集98-114min和210-220min的流出液；所述溶剂体系水：正丁醇：甲基叔丁基醚：乙腈：三氟乙酸的比例为 5：3－4：1：1－2：0.001：

其中，所述锦葵素-[3-O-葡萄糖-]-[5-O-葡萄糖]的结构式如下：

所述锦葵素-[3-O-β-葡萄糖基-6-香豆酰]-[5-O-β-D-葡萄糖] 的结构式如下：

。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述溶剂体系水：正丁醇：甲基叔丁基醚：乙腈：三氟乙酸的比例为5：4：1：2：0.001或者5：3：1：1：0.001。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，其中固定相泵满管路，再泵入流动相具体为：固定相以20mL/min的流速泵满管路，再以850rpm/min正转，流速2 mL/min的条件泵入流动相；温度设置为25℃，检测波长280nm。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述高速逆流分离的上样量150-250 mg。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述高速逆流分离的上样量 200mg。