[发明专利]一种用于检测沙门氏菌活性的荧光RAA引物、探针及检测方法

说明书

本发明提供了一种用于检测粪便样品中沙门氏菌的荧光RAA引物和探针及检测方法，该荧光RAA引物和荧光探针可以快速、定性检测粪便样本中的沙门氏菌，能在39℃常温下检测，20分钟内即可出诊断结果，大大缩短检测时间；该荧光RAA引物和荧光探针特异性更强、灵敏度更高，完全满足疫情快速诊断和全程监控，为疫情早诊断、早治疗、降低病死率以及控制疫情争取时间。

技术领域

本发明属于体外核酸检测领域，具体涉及一种用于检测粪便样品中沙门氏菌活性的荧光RAA引物和探针及检测方法。

背景技术

沙门氏菌病又称副伤寒，是各种动物由沙门氏菌属细菌引起疾病的总称，也是公共卫生学上重要的人畜共患病之一，人畜感染后可呈无症状带菌状态，也可表现为有临床症状的致死疾病，它可能加重病情和死亡率，或者降低动物的繁殖生产力。蛋、家禽和肉类产品是沙门氏菌的主要传播媒介，感染主要取决于沙门氏菌的血清型和食用者的身体状况。1885年沙门氏等在霍乱流行时分离到猪霍乱沙门氏菌，故定名为沙门氏菌属。

沙门氏菌是一种寄生于人和动物肠道内的革兰氏阴性无芽孢杆菌，绝大多数有鞭毛并能运动，对营养要求不高，耐胆盐，对外界的抵抗力较强，在自然界中广泛存在。其血清型多，分布广泛，在肠菌科中是一种重要的人畜共患病原菌，是食品、水源及畜产品的重要污染源，可引起人食物中毒、急性肠胃炎和动物腹泻等疾病。沙门氏菌是最常见的食源性致病菌，也是食物传播病原菌中研究最活跃的细菌。在食物中毒中，由沙门氏菌引起的中毒病例，约占细菌性食物中毒的40％。由于绝大多数沙门氏菌对任何动物都有致病性，能引起人和多种动物的肠道感染，是污染禽肉、禽蛋等动物性食品的主要病原菌，常引起人食物中毒。

沙门氏菌作为食品检测的一项重要指标，在公共卫生、口岸检疫和畜牧兽医上有重要的意义。目前，沙门氏菌检测方法的包括传统的检测方法、免疫学检测以及分子生物学检测方法等。

传统的检测方法检测周期长，且分离阳性率低，往往会延误病程和疫情的控制。分子生物学诊断方法可以在症状时期检测到细菌的感染，并且快速灵敏，目前已被广泛的应用于沙门氏菌的检测。目前，国内外已建立的沙门氏菌检测方法有实时PCR检测方法、半巢式PCR检测方法、LAMP检测方法等，但PCR方法需要使用复杂的仪器和装备精良的实验室，而LAMP方法引物较复杂，必须用特殊的软件设计，且用LAMP方法得到的扩增产物是一些大小不等的片段，无法直接克隆和测序，只能用于判断目的基因的存在。

发明内容

本发明目的是提供一种用于重组酶介导核酸扩增技术检测沙门氏菌活性的荧光RAA引物和荧光探针以及使用该荧光RAA引物和荧光探针对沙门氏菌活性的检测方法，该检测方法可以快速、定性检测粪便样本中的沙门氏菌活性。

本发明的一个目的是提供一种用于检测沙门氏菌的引物对，所述引物对包括下述1)-3)中的至少一种：

1)序列表中SEQ ID №：1所示核苷酸序列和序列表中SEQ ID №：2所示核苷酸序列；

2)在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID №：1限定的核苷酸序列杂交的核苷酸序列；和在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID №：2限定的核苷酸序列杂交的核苷酸序列；

3)与1)、或2)限定的核苷酸序列具有90％以上同源性，且具有相同功能的核苷酸序列。

具体的，所述同源性为95％以上；再具体的为96％以上；再具体的为97％以上；再具体的为98％以上；再具体的为99％以上。

上述高严谨条件可为用6×SSC，0.5％SDS的溶液，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

所述具有相同功能具体包括能用于检测或特异性扩增沙门氏菌基因组中的特异保守区域核苷酸序列。

本发明的再一个目的是提供一种用于检测沙门氏菌的探针，所述探针包括下述1)-3)中的至少一种：