[发明专利]一种基因工程菌及其在制备L-草铵膦中的应用有效
| 申请号： | 201810645755.5 | 申请日： | 2018-06-21 |
| 公开（公告）号： | CN108795835B | 公开（公告）日： | 2020-08-04 |
| 发明（设计）人： | 杨立荣;蒙丽钧;周海胜;刘亚运;尹新坚;徐刚;吴坚平 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12P13/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡红娟 |
| 地址： | 310013 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基因工程 及其 制备 草铵膦 中的 应用 | ||
1.一种基因工程菌，包括大肠杆菌和转入大肠杆菌的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒包含转氨酶基因和磷酸吡哆醛合成途径酶基因；
所述转氨酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述磷酸吡哆醛合成途径酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，
所述重组质粒由包含转氨酶基因的表达载体I和包含磷酸吡哆醛合成途径酶基因的表达载体II组成，所述表达载体I为pET28，所述表达载体II为pCDFDuet；或者，所述重组质粒由同时包含转氨酶基因和磷酸吡哆醛合成途径酶基因的共表达载体构成，所述共表达载体为pETDuet。
2.如权利要求1所述的基因工程菌在制备L-草铵膦中的应用。
3.一种制备L-草铵膦的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)构建基因工程菌，采用A方案或者B方案：
A.将转氨酶基因和磷酸吡哆醛合成途径酶基因分别克隆至不同的表达载体上，得到重组质粒I和重组质粒II；再将重组质粒I和重组质粒II共转化至大肠杆菌中，得到基因工程菌；所述基因工程菌如权利要求1所述；
B.将转氨酶基因和磷酸吡哆醛合成途径酶基因克隆至同一表达载体上，得到重组质粒X；再将重组质粒X转化至大肠杆菌中，得到基因工程菌；所述基因工程菌如权利要求1所述；
(2)培养所述基因工程菌，并诱导酶类表达，离心收集细胞，制备静息细胞悬液；
(3)以2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸或其盐为底物，在添加氨基供体但不添加磷酸吡哆醛的情况下，利用所述静息细胞悬液作为催化剂，进行还原胺化反应，获得L-草铵膦。
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