[发明专利]一种无血清培养基及其制备与细胞培养方法在审
| 申请号： | 201810646178.1 | 申请日： | 2018-06-21 |
| 公开（公告）号： | CN108753709A | 公开（公告）日： | 2018-11-06 |
| 发明（设计）人： | 杨涛;隋昳 | 申请（专利权）人： | 深圳至博生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 深圳市精英专利事务所 44242 | 代理人： | 龙丹丹 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市龙华区观湖街道*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 血小板裂解液 无血清培养基 间充质干细胞 培养基 制备 细胞培养 培养基培养细胞 免疫排斥反应 生物安全性 血清培养基 反复冻融 工艺步骤 连续传代 批量制备 同种异体 细胞形态 细胞因子 血清制备 异种蛋白 增殖能力 肝素钠 富含 裂解 全血 体外 自体 增殖 分化 细胞 | ||
1.一种无血清培养基，其特征在于，所述培养基包括IMDM培养基、血小板裂解液和肝素钠。
2.根据权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于，所述血小板裂解液的体积浓度为5％，所述肝素钠的含量为10U/ml。
3.一种制备如权利要求1或2所述无血清培养基的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、获取血小板，通过冻融裂解处理使血小板裂解并释放生长因子；
S2、将经步骤S1处理得到的冻融血小板离心处理，取上清液；
S3、将所述上清液过滤处理，得到血小板裂解液。
S4、按比例将步骤S3得到的血小板裂解液与肝素钠添加到IMDM培养基中，得到无血清培养基。
4.根据权利要求3所述的无血清培养基的制备方法，其特征在于，所述步骤S1包括如下步骤：
S11、获取浓度为1.0*1012/L的血小板；
S12、将所述血小板在-80℃下冷冻过夜；
S13、将步骤S12处理后的血小板置于37℃下溶融，使血小板裂解并释放生长因子；
S14、重复上述步骤S12、S13冷冻溶融的操作5次，得到冻融血小板。
5.根据权利要求4所述的无血清培养基的制备方法，其特征在于，所述步骤S2为将所述冻融血小板在4℃下以3500r/min的离心速度离心处理30min。
6.根据权利要求5所述的无血清培养基的制备方法，其特征在于，所述步骤S3所述的过滤处理为将上清液通过0.22μm的微孔过滤膜过滤，即得血小板裂解液。
7.一种利用如权利要求1或2所述的无血清培养基培养细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：
a、获取脐带，并将脐带置于消化液中消化处理；
b、将消化处理后的混合物过滤去除未消化组织，过夜消化；
c、将过滤消化后得到的混合物离心，收集细胞；
d、将所述细胞在所述无血清培养基中培养。
8.根据权利要求7所述的细胞培养方法，其特征在于，所述步骤a中消化处理前还包括将获取的脐带置于含15mmol/L柠檬酸钠、100U/mL青霉素及100mg/L链霉素的无菌瓶中保存的步骤。
9.根据权利要求8所述的细胞培养方法，其特征在于，所述消化处理具体为：将脐带用浓度为0.2％的IV型胶原酶在37℃下消化30min，然后加入含0.125％胰酶的EDTA溶液，在37℃下消化30min，最后加入与上述混合液等体积的血清终止胰酶消化。
10.根据权利要求9所述的细胞培养方法，其特征在于，所述步骤c中离心处理过程中离心速度为1000r/min，离心处理时间为5min；所述步骤d为将细胞在含5％CO2的培养箱中于37℃下培养，并按时更换培养基。
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