[发明专利]靶向癌症的重组溶瘤基因-腺病毒及其构建方法和应用

说明书

本发明公开了一种靶向癌症的重组溶瘤基因‑腺病毒Ad‑sp‑E1A‑ΔE1B‑VGLL4，所述重组溶瘤基因‑腺病毒Ad‑sp‑E1A‑ΔE1B‑VGLL4由survivin启动子驱动病毒E1A基因，同时病毒基因组敲除了E1B基因区域，并在该基础上插入了VGLL4表达框片段。本发明还公开了所述重组溶瘤基因‑腺病毒Ad‑sp‑E1A‑ΔE1B‑VGLL4的构建方法及其在制备治疗癌症药物中的应用。本发明的重组溶瘤基因‑腺病毒Ad‑sp‑E1A‑ΔE1B‑VGLL4，其借助腺病毒载体的在癌细胞中特异性地复制，在抗癌试验中都取得了很好的治疗效果。

技术领域

本发明涉及重组溶瘤基因-腺病毒技术领域，具体地说，是关于一种靶向癌症的重组溶瘤基因-腺病毒及其构建方法和应用。

背景技术

癌症严重影响人类的健康和发展，受医疗和环境条件的影响，中国癌症死亡率高于全球平均水平。肿瘤的传统疗法存在疗效差，死亡率高及预后复发率高等缺点，因此人们开始对新兴的肿瘤治疗方法寄予厚望。新兴的治疗肿瘤的策略也在不断的发展之中，目前比较被认同的策略包括免疫疗法、基因疗法、溶瘤病毒疗法等。

目前，仅仅使用基因治疗或者特异性靶向肿瘤的病毒治疗癌症，其效果十分有限。但在肿瘤特异性病毒上插入抗癌基因，让病毒疗法与基因治疗协同作战，即在同时发挥生物治疗策略的多重治疗效果，则会大大提高病毒的安全性并增强基因治疗的疗效。靶向基因-病毒治疗中的病毒载体本身会显著性地发挥杀伤肿瘤的作用，再者，靶向基因-病毒治疗中的基因的拷贝数会随着病毒复制增殖而链式增长，同时基因的表达量也会极大地提高。总而言之，靶向基因-病毒治疗策略所具备的靶向性、安全性、基因表达量极高等独特优势，极大地推动靶向基因-病毒治疗的长足发展，为人类最终战胜癌症发挥重要的作用。但是，目前的各种基因载体并不能够在人体内特异性选择肿瘤细胞，也不能在肿瘤细胞中高效表达抗癌基因，从而导致基因治疗的效果较弱和误伤人体正常细胞的可能性。

另外，对于早期癌症，现有的方法是多采用外科手术的方法切除肿瘤，效果较理想，但一些肿瘤的隐匿期长，不易被及早发现，错过了治疗的最佳时间。而中晚期阶段手术的方法已不可行，一般进行化疗或者放疗，而传统的放化疗手段，但都存在疗效差，副作用高的缺点。现在的医疗水平，不管是手术治疗或者是药物治疗对患者的伤害性都很大，除可一定程度上缓解患者的症状之外，不能有效的延长患者生存时间。

Hippo通路是一条控制细胞形态和大小的关键性通路，是由一系列的蛋白激酶和转录因子组成的激酶链，这条通路在肿瘤细胞中非常活跃。Hippo通路的末端效应蛋白是YAP，其在人体各个组织中均有表达，其共转录的下游基因大多为促进细胞增殖迁移的基因。据研究报道，在胃癌、结肠癌、肺癌等多种肿瘤细胞中，YAP的表达量均显著提高，远远高于正常细胞，所以肿瘤细胞中YAP成为了科研人员手中一种新的靶标，甚至被公认为是具有前景、重要的治疗靶标。

退变性蛋白家族(Vestigial-like，VGLL)成员不具有DNA结合结构域，是通过DNA结合结构域调控基因转录。人体中有4种VGLL蛋白，命名为VGLL1-4，这些蛋白质没有序列相似性。VGLL4又称为退变性蛋白家族成员4，是退变性蛋白家族中的新成员，它与其他成员的区别在于：1)VGLL1-3蛋白只有1个保守的TDU结构域，且在N端，而VGLL4有两个独立的保守TDU结构域，且在C端；2)VGLL1和VGLL3主要在胎盘中表达，VGLL2在骨骼肌中表达，而VGLL4是唯一在心脏中表达的基因家族成员。VGLL4是一种共转录因子，能通过TDU结构域与YAP竞争性结合TEAD转录因子而发挥作用。所以说VGLL4蛋白是一种有前景的抗YAP驱动的人类癌症的治疗基因。