[发明专利]一种溶菌酶分子印迹温度敏感性水凝胶的制备方法

权利要求书

1.一种溶菌酶分子印迹温度敏感性水凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下操作：

1）按照1～5：100：100质量比，将功能单体氯化1-羧甲基-3-乙烯基咪唑、支撑单体N-异丙基丙烯酰胺和印迹分子溶菌酶溶解在pH=7的Tris-HCl缓冲溶液中得到预聚体系；

所述的Tris-HCl缓冲溶液与N-异丙基丙烯酰胺质量比为10：1；

2）向所得的预聚体系中加入交联剂N,N-亚甲基双丙烯酰胺，其加入量为N-异丙基丙烯酰胺质量的1～5%；

然后加入引发剂过硫酸铵，其加入量为N-异丙基丙烯酰胺质量的1～2%，充分混合得到反应混合溶液；

3）将反应混合溶液在25～30℃下超声除氧20～30min后，通入氮气30～50min，然后迅速加入四甲基乙二胺，密封；四甲基乙二胺加入量为N-异丙基丙烯酰胺质量的1～2% ；

4）25～30℃下反应3～6h，制得温度敏感性水凝胶；

5）将得到的温度敏感性水凝胶进行洗脱：

将温度敏感性水凝胶用打孔器打成圆片，然后放入到Tris-HCl缓冲溶液中25～30℃下洗脱24～48h，随后再放入到去离子水中浸泡24h，取出后在 40～50℃下真空干燥12～24h，得到溶菌酶分子印迹温度敏感性水凝胶。

2.如权利要求1所述的溶菌酶分子印迹温度敏感性水凝胶的制备方法，其特征在于，溶菌酶分子印迹温度敏感性水凝胶的印迹因子的测定为：

将10mg的溶菌酶分子印迹温度敏感性水凝胶和10mg的空白温度敏感性水凝胶分别放入Tris-HCl缓冲溶液中，25℃下充分溶胀24h；再将它们取出，分别放入到10mL的含5mg/mL溶菌酶的Tris-HCl缓冲液中，25℃下静置24h；用紫外分光光度计分别测量两种缓冲液中溶菌酶浓度，其中放有溶菌酶分子印迹温度敏感性水凝胶的，其溶菌酶浓度记为x，放有空白温度敏感性水凝胶的，其溶菌酶浓度记为y，得到印迹因子F=5-x/ 5-y。

3.如权利要求1或2所述的溶菌酶分子印迹温度敏感性水凝胶的制备方法，其特征在于，所制备的溶菌酶分子印迹温度敏感性水凝胶印迹因子为1.94～2.33。