[发明专利]一种溶菌酶分子印迹温度敏感性水凝胶的制备方法

说明书

本发明公开了一种溶菌酶分子印迹温度敏感性水凝胶的制备方法，以氯化1‑羧甲基‑3‑乙烯基咪唑离子液体作为功能单体、N‑异丙基丙烯酰胺(NIPAm)作为支撑单体，N、N‑亚甲基双丙烯酰胺(BIS)作为交联剂，过硫酸铵(APS)和四甲基乙二胺(TEMED)作为氧化还原引发剂，三羟甲基氨基甲烷与盐酸(Tris‑HCl)的缓冲溶液(pH＝7，10mM，25℃)为溶剂，溶菌酶(Lyz)作为印迹分子的分子印迹温度敏感性水凝胶的制备方法，获得的水凝胶对Lyz均具有较高的印迹效率和良好的识别效果。

技术领域

本发明属于分子印迹技术领域，涉及一种溶菌酶分子印迹温度敏感性水凝胶的制备方法。

背景技术

分子印迹技术是指制备对某一特定的目标分子具有特异选择性的聚合物过程。印迹技术的实现，一般是先通过功能单体与目标分子（即印迹分子）预组装，随后在交联剂的存在下聚合，获得能够与印迹分子产生作用的聚合物，随着印迹分子被洗脱，剩下的聚合物对印迹分子同时具有吸附作用和特异性空穴，可以实现对印迹分子单一性识别的过程。其中，蛋白质分子印迹技术由于可以广泛应用于在色谱分析、蛋白质、多肽纯化与分离、临床医学等领域，受到了许多国内外研究人员的关注。然而，在目前的研究中蛋白质分子印迹聚合物的分离效果并不尽如人意，究其原因，主要是由于蛋白质分子印迹聚合物难以洗脱，并且用于合成分子印迹聚合物的功能单体与蛋白质分子之间的作用力较弱，因此，为了获得对蛋白质具有良好识别作用的分子印迹聚合物，功能单体的选择与分子印迹聚合物的形态十分重要。

离子液体作为新兴的绿色材料，与传统的分子材料相比具有其独特的优势，它几乎没有蒸汽压，可以作为绿色反应物与溶剂应用于化学过程；它具有阴、阳离子可调性，研究者可以按照自己的需求，设计阴、阳离子的结构，获得他们所需性质的离子液体。近些年来，离子液体作为功能单体应用于分子印迹技术逐渐成为研究的热点。与传统的丙烯酸类、4-乙烯基吡啶类氢键作用方式的功能单体相比，离子液体功能单体是以静电作用吸引印迹分子，在水相体系中具有十分明显的优势。Guo Lu等人于2011年首次报道了以氯化1-乙烯基-3-丁基咪唑离子液体（VBIM⁺Cl^-）为功能单体制备氯磺隆分子印迹聚合物的研究工作，所制备印迹聚合物具有较好的识别效果。随后，该研究小组又于2012年以VBIM⁺Cl^-为功能单体，制备出对溶菌酶、牛血红蛋白、细胞色素C等蛋白质具有良好吸附作用的聚合物。

水凝胶是一类在水中显著溶胀而不溶解的亲水性高分子网络，由于具有与生物组织类似的含水量与结构，水凝胶有很好的生物相容性。温度敏感性水凝胶是指那些水含量会随外界温度的微小变化而产生突变的水凝胶，它们可以广泛的应用于生物物质的分离提纯、药物控制释放等领域。

发明内容

为了解决溶菌酶分子印迹聚合物的识别效率低、洗脱难的问题，本发明提供一种溶菌酶分子印迹温度敏感性水凝胶的制备方法，将分子印迹技术与温度敏感性水凝胶相结合，获得的水凝胶对溶菌酶均具有较高的印迹效率和良好的识别效果。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种溶菌酶分子印迹温度敏感性水凝胶的制备方法，包括以下操作：

1）按照1～5：100：100质量比，将功能单体氯化1-羧甲基-3-乙烯基咪唑、支撑单体N-异丙基丙烯酰胺和印迹分子溶菌酶溶解在pH=7的Tris-HCl缓冲溶液中得到预聚体系；

所述的Tris-HCl缓冲溶液与N-异丙基丙烯酰胺质量比为10：1；

2）向所得的预聚体系中加入交联剂N,N-亚甲基双丙烯酰胺，其加入量为N-异丙基丙烯酰胺质量的1～5%；

然后加入引发剂过硫酸铵，其加入量为N-异丙基丙烯酰胺质量的1～2%，充分混合得到反应混合溶液；