[发明专利]一种添加渗透保护剂提高微藻保存成活率的方法

说明书

本发明提供了微藻保种技术邻域内的一种添加渗透保护剂提高微藻保存成活率的方法，其先将藻种和实验材料在无菌操作下下在培养皿里，培养数天，离心收藻种备用，然后称取适量渗透保护剂，倒入藻种中，混合均匀，移入冻干管中，平衡一定时间，将冻干管放入低温浴槽中，以一定降温速率降至从0^oC降温到‑30^oC～‑40^oC，预冻一段时间，然后又投入液氮(‑196℃ )中，保种，最后定时取样进行复活试验，室温下培养10天，先目测，后镜检，以判断藻种是否存活以及藻种的存活率；本发明的备方法简单，操作简单，不易污染，保种时间较长。

技术邻域

本发明涉及一种保种技术，特别涉及一种添加渗透保护剂提高微藻保存成活率的方法。

背景技术

微藻的营养丰富，在人们的生活和生产实践中具有很广援的应用，在微藻的培养和应用中，保种技术十分重要，大规模微藻产业仅仅靠培养微藻是不够的，必须将藻种保存起来备用，才能满足需要，但微藻在保种过程中出现藻种单细胞纯种随环境变化发生变异，丧失自身的生理活性和遗传特性，使藻种复苏时部分藻种失活，藻种存活率较低。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的在于克服上述现有技术中的不足之处，提供一种添加渗透保护剂提高微藻保存成活率的方法，制备方法简单，操作简单，不易污染，保种时间较长。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种添加渗透保护剂提高微藻保存成活率的方法，所述制备方法包括以下步骤：

（A1）藻种培养：藻种和实验材料在无菌操作下培养数天，离心收藻，4^oC冰箱备用；

（A2）加入渗透保护剂：称取适量渗透保护剂，加入藻种中，混合均匀，移入冻干管中，平衡一定时间；

（A3）梯度降温保种：将上述冻干管放入KF-4型低温浴槽中，以一定降温速率降至从0^oC降温到-30^oC～-40^oC，预冻一段时间，然后又投入液氮(-196℃ )中，保种；

（A4）检测：定时取样进行复活试验，室温下培养10天，先目测，后镜检，以判断是否存活。

本发明首先将藻种和实验材料在无菌操作下下在培养皿里，培养数天，然后离心收藻种，4^oC冰箱备用，然后精密天平称取适量渗透保护剂，倒入藻种中，诱导藻种对低温的抗性，玻璃棒搅拌混合均匀，移入冻干管中，平衡一定时间，将冻干管放入KF-4型低温浴槽中，以一定降温速率降至从0^oC降温到-30^oC～-40^oC，预冻一段时间，然后又投入液氮(-196℃ )中，保种，最后定时取样进行复活试验，室温下培养10天，先目测，后镜检，以判断藻种是否存活以及藻种的存活率；与现有技术相比，本发明的有益效果在于：该方法制备方法简单，操作简单，保种时间较长，藻种存活率较高。

作为本发明的进一步改进，所述渗透保护剂包括蔗糖、聚乙二醇或二甲基亚砜的一种。

作为本发明的进一步改进，所述降温速率为0.5～1^oC/min。

具体实施方式

实施例1

一种添加渗透保护剂提高微藻保存成活率的方法，为制备微藻保种，其按如下步骤进行：

（A1）藻种培养：藻种和实验材料在无菌操作下培养数天，离心收藻，4^oC冰箱备用；

（A2）加入渗透保护剂：精密天平称取适量渗透保护剂蔗糖，倒入藻种中，诱导藻种对低温的抗性，玻璃棒搅拌混合均匀，移入冻干管中，平衡一定时间，4^oC冰箱备用；