[发明专利]一种基于免疫磁珠的沙丁胺醇样本前处理试剂盒

权利要求书

1.一种基于免疫磁珠的沙丁胺醇样本前处理试剂盒，其特征在于，包括以下步骤：该试剂盒由样本仓、试剂仓、清洗仓、洗脱仓等几个部分组成；

样本仓用于放置样本的前处理溶液，试剂仓用于放置免疫磁珠，免疫磁珠上偶联了沙丁胺醇抗体，清洗仓用于放置清洗液清洗，洗脱仓主要用于洗脱反应结合物；

步骤主要包括以下：

（1）免疫磁珠的捕获收集样本

首先将样本前处理溶液放于样本仓中，抗沙丁胺醇抗体免疫磁珠放入试剂仓，旋转混匀，然后将免疫磁珠加入到样本仓中，旋转重悬，37℃下旋转捕获30min，以实现最大程度地捕获样本中的沙丁胺醇，磁分离，弃去上清液；将捕获过样本的免疫磁珠在清洗仓中使用清洗液清洗，轻摇重悬，磁分离，弃上清；此过程可重复2-3次；

免疫磁珠捕获沙丁胺醇完成后，再经磁分离，从而实现沙丁胺醇样本的富集净化；去除磁分离后的上清，沉淀即为捕获了沙丁胺醇的免疫磁珠；

（2）免疫磁珠的洗脱

将步骤（1）中得到的免疫磁珠中在洗脱仓中加入洗脱液进行洗脱，室温震荡几秒钟，磁分离，上清液即为富集净化后的沙丁胺醇样本，可用于后续的测定。

2.根据权利要求1所述的一种基于免疫磁珠的沙丁胺醇样本前处理试剂盒，其特征在于所述的免疫磁珠富集净化沙丁胺醇的最佳反应条件为，37℃下，pH7.4，0.02mo1/L的含甲醇10%的PBS缓冲液中旋转捕获30min。

3.根据权利要求1所述的一种基于免疫磁珠的沙丁胺醇样本前处理试剂盒，其特征在于所述的采用的捕获缓冲液优选为pH7.4，0.02mo1/L的含甲醇10%的PBS缓冲液。

4.根据权利要求1所述的一种基于免疫磁珠的沙丁胺醇样本前处理试剂盒，其特征在于所述的洗脱液采用无水甲醇，免疫磁珠在洗脱液中的浓度采用5-10mg/mL。

5.根据权利要求1所述的一种基于免疫磁珠的沙丁胺醇样本前处理试剂盒，其特征在于优选地，步骤（1）中抗沙丁胺醇抗体特异性免疫磁珠的具体制备方法为：

S1清洗：分别取0.4mg磁珠于2mL离心管中，使用200μL PBT（0.02mo1/L，pH7.4，含0.05%Tween-20）清洗2次，洗涤后用250μL PBS缓冲液（0.02mo1/L，pH7.4）超声分散重悬；

S2活化：分别加入200μL用PBS缓冲液（0.02mo1/L，pH7.4）配制的EDC和NHS，37℃活化2h，保持悬浮状态；

S3偶联：磁分离，吸去上清液，同上PBT缓冲液洗涤三次，超声重悬；

再分别将200μg的抗沙丁胺醇抗体加入到已活化的磁珠中，37℃偶联反应5h，15 r/min旋转保持悬浮状态；

S4封闭：磁分离，取出上清液，加入100μL的乙醇胺溶液和BSA封闭液，37℃封闭2h，保持悬浮状态；

S5保存：用PBT洗涤磁珠3次，磁分离，弃上清液，用250μLPB缓冲液（0.02mo1/L，pH7.4，含0.02%NaN3和0.5%BSA）重悬，于4℃保存；

优选地，上述步骤中所述的活化剂为EDC和NHS，浓度均为1-5mg/mL，用活化缓冲液溶解；

优选地，上述制备免疫磁珠的方法中，偶联缓冲液优选pH7.4，0.02mo1/L的PBS缓冲液；洗涤液优选含0.05%Tween-20的pH7.4，0.02mo1/L的PBT缓冲液；活化剂以PB缓冲液配制；封闭液优选以PBS缓冲液配制的5%BSA溶液。

6.根据权利要求1所述的一种基于免疫磁珠的沙丁胺醇样本前处理试剂盒，其特征在于所述的免疫磁珠通过化学偶联法将磁性微球表面修饰上活性基团，如氨基(-NH₂)、羧基(-COOH)或环氧基等，采用的化学试剂为EDC和NHS，浓度均为1-5mg/mL。

7.根据权利要求1所述的一种基于免疫磁珠的沙丁胺醇样本前处理试剂盒，其特征在于所述的免疫磁珠偶联的偶联了沙丁胺醇抗体为沙丁胺醇单克隆抗体、沙丁胺醇多克隆抗体、核酸适配体等。