[发明专利]一种基于免疫磁珠的沙丁胺醇样本前处理试剂盒

说明书

本发明提供一种基于免疫磁珠的沙丁胺醇样本前处理试剂盒的制备及应用，该试剂盒主要由样本仓、试剂仓、清洗仓、洗脱仓等几个部分组成。本发明通过免疫磁珠的富集作用以及免疫磁珠在液体中充分扩散使得结合表面积扩大，免疫反应更加彻底，可广泛应用于动物组织、水产品、肉制品等产品中沙丁胺醇的富集与分离，从而能够提高检测的灵敏度，避免漏检的现象；同时减少了大量的有机溶剂的使用。

技术领域

本发明涉及一种基于免疫磁珠的沙丁胺醇样本前处理试剂盒。

背景技术

沙丁胺醇为一种人工合成的β肾上腺素兴奋剂，在现代畜牧养殖中被用作瘦肉精，以加速动物增长和提高脂肪型动物的瘦肉率，然而沙丁胺醇摄入过量会对人体造成极其严重的危害，易出现肌肉振颤、头疼、恶心、呕吐等症状，特别是对高血压、心脏病、甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更大，严重的可导致死亡。2002年开始我国禁止在畜牧业中使用沙丁胺醇。

由于生物组分的复杂性、待测物浓度低、前处理过程复杂等因素，现有的沙丁胺醇的提取工艺并不稳定，造成提取沙丁胺醇的富集效率低等，降低了检测的灵敏度和特异性，因而急需开发可以提高沙丁胺醇的富集效率的装置。

免疫磁珠是由作为载体的磁性微球和免疫配基结合而成的纳米级材料。磁性微球载体通常是带有氨基、羧基、羟基或巯基等化学官能团的磁珠，该官能团与不同的免疫配基如活性蛋白、抗体、抗原、亲和素、生物素等结合形成免疫磁珠。磁性微球载体具有超顺磁性特点，可使免疫磁珠置于磁场时，显示其磁性，从磁场移出时，磁性消除，免疫磁珠重新分散。包被抗体的免疫磁珠作为固相载体，其上的抗体与相应抗原发生特异性结合形成抗原-抗体-磁珠复合物，这种复合物在磁场作用下，迅速向磁场移动，使复合物与其他物质分离，达到分离特异性抗原的目的，这种分离方法具有检测速度快、特异性高、灵敏度高、重复性好等优势。免疫磁珠的磁分离方法可重复性好，操作简单，不需昂贵的仪器设备，不影响被分离生物材料的生物学性状和功能，并由于磁珠特殊的性能，可以将免疫检测实现自动化，用于大规模样本的检测，其反应动力学较传统免疫检测方法快，并且具有更大的固相结合表面。

发明内容

本发明的目的是为了弥补现有技术存在的不足，提供一种用于免疫磁珠的沙丁胺醇样本前处理试剂盒，用于样本中沙丁胺醇富集于净化，以解决沙丁胺醇样本样品净化分离操作复杂、分离效率低的等技术问题。免疫磁珠经过适量活化剂（EDC-NHS组合）处理后，使得磁珠表面带有亲和配基，通过亲和层析法与沙丁胺醇抗体在合适的反应条件下进行偶联，得到富集沙丁胺醇抗体特异性免疫磁珠，使用沙丁胺醇抗体特异性免疫磁珠对沙丁胺醇的溶液进行吸附，以富集和纯化样本中沙丁胺醇，以便后续的测量。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种基于免疫磁珠的沙丁胺醇样本前处理试剂盒，该试剂盒由样本仓、试剂仓、清洗仓、洗脱仓等几个部分组成。样本仓用于放置样本的前处理溶液，试剂仓用于放置免疫磁珠，免疫磁珠上偶联了沙丁胺醇抗体，清洗仓用于放置清洗液清洗，洗脱仓主要用于洗脱结合物。

基于上述免疫磁珠的沙丁胺醇样本前处理试剂盒，主要包括以下：

（1）首先将样本前处理溶液放于样本仓中，抗沙丁胺醇抗体免疫磁珠放入试剂仓，旋转混匀，然后将免疫磁珠加入到样本仓中，旋转重悬，37℃下旋转捕获30min，以实现最大程度地捕获样本中的沙丁胺醇，磁分离，弃去上清液；将捕获过样本的免疫磁珠在清洗仓中使用清洗液清洗，轻摇重悬，磁分离，弃上清；此过程可重复2-3次。免疫磁珠捕获沙丁胺醇完成后，再经磁分离，从而实现沙丁胺醇样本的富集净化；去除磁分离后的上清，沉淀即为捕获了沙丁胺醇的免疫磁珠；

（2）免疫磁珠的洗脱

将步骤（1）中得到的免疫磁珠中在洗脱仓中加入洗脱液进行洗脱，室温震荡几秒钟，磁分离，上清液即为富集净化后的沙丁胺醇样本；