[发明专利]一种动态记录苹果花粉管微丝形态的方法及其试剂盒

说明书

本发明公开了一种动态记录苹果花粉管微丝形态的方法及其试剂盒，本研究以同一地域、同一树龄(10年)、生长势一致的‘金冠’苹果树上的一年生枝条上的大气球期中心花为材料，经过花朵采摘，4℃低温短时期保存，花粉常温干燥、花粉基因枪轰击微丝的marker，Lat52‑lifeact基因，固体培养基培养2‑3h，激光共聚焦观察正常生长过程中微丝骨架排列方式。为直观观察木本植物花粉管内微丝骨架结构与排列方式提供技术支持。

技术领域

本发明涉及植物生物技术领域，具体地说，涉及一种动态记录苹果花粉管微丝形态的方法及其试剂盒。

背景技术

植物的细胞骨架包括微丝和微管，它们组成不同的列阵参与细胞分裂、生长和分化等众多的生理过程。不同的真核生物细胞骨架的排列差异很大，花粉管细胞中的微丝骨架在生殖过程中承担着重要的角色。以往的研究主要集中在体外培养花粉管并观察其细胞微丝骨架的形态，那么如何能够清晰直观地观察花粉管在生长过程中微丝骨架的动态变化、微丝循环、花粉管顶端、亚顶端、颈部的微丝结构变换、单根微丝的生命。花粉管正常生长承担着延续生命的重要职责，大量的离子和蛋白会沿着微丝‘行走’进行物质运输和信号转导，其功能和机制的研究充满着谜题，由于苹果属于多年生木本植物，不仅杂合度高而且染色体经历过多次的加倍和变异，微丝蛋白分子量大且具有高度的复杂性，所以动态实时观测花粉管微丝骨架至今没有在苹果上突破。

本研究以同一地域、同一树龄(10年)、生长势一致的‘金冠’苹果树上的一年生枝条上的大气球期中心花为材料，经过花朵采摘，4℃低温短时期保存，花粉常温干燥、花粉基因枪轰击微丝的marker，Lat52-lifeact基因，固体培养基培养2-3h，激光共聚焦观察正常生长过程中微丝骨架排列方式。为直观观察木本植物花粉管内微丝骨架结构与排列方式提供技术支持。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于动态记录苹果花粉管微丝形态的试剂盒。

本发明的另一目的是提供一种动态记录苹果花粉管微丝形态的方法。

为了实现本发明目的，本发明提供一种动态记录苹果花粉管微丝形态的试剂盒，包括以下试剂组合：

用于配制金粉悬液的试剂：粒径为0.06～0.08μm的金粉、质量百分含量为65％～70％的乙醇和质量百分含量为40％～50％的甘油；

用于制备DNA子弹的试剂：1.5～2.0mol/L CaCl₂、0.05～0.10mol/L亚精胺、质量百分含量为65％的乙醇和无水乙醇；

花粉液体培养基：由0.06～0.08g/ml葡萄糖、0.20～0.25mg/ml CaCl₂和0.06～0.08mg/ml硼酸组成。

优选地，所述试剂盒包括以下试剂组合：

用于配制金粉悬液的试剂：粒径为0.08μm的金粉、质量百分含量为70％的乙醇和质量百分含量为50％的甘油；

用于制备DNA子弹的试剂：2.0mol/L CaCl₂、0.10mol/L亚精胺、质量百分含量为65％的乙醇和无水乙醇；

花粉液体培养基：由0.06～0.08g/ml葡萄糖、0.20～0.25mg/ml CaCl₂和0.06～0.08mg/ml硼酸组成。

本发明还提供利用所述试剂盒动态记录苹果花粉管微丝形态的方法，包括以下步骤：

1)配制金粉悬液；

2)制备DNA子弹；

3)用培养皿体外培养花粉，收集完成水合的花粉；

4)将水合完毕的花粉平铺于用花粉液体培养基湿润的NC尼龙膜上；