[发明专利]一种用于检测人药物基因多态性的多重PCR检测试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测人药物基因多态性的多重PCR检测试剂盒，其特征在于：包括根据VKORC1、UGT1A1、HLA-A、HLA-B、TPMT、NAT1、NAT2、G6PD、F5、F2、IFNL3、APOE、COMT、CYP1A2、CYP2B6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2D6、CYP3A5、MTFHR、SLCO1B1、DPYD基因的多态性位点设计的在同一反应体系中反应的六十六PCR扩增引物对及在同一反应体系中反应的六十六单碱基延伸引物；其中，

上述六十六PCR扩增引物对包括第一至第六十六扩增引物对，第一至第六十六扩增引物对的正向引物依次如SEQ D NO 01～066所示，反向引物依次如SEQ ID NO 067～132所示；上述六十六单碱基延伸引物包括第一至第六十六单碱基延伸引物，依次如SEQ ID NO133～198所示；

其使用方法包括如下步骤：

(1)以待检测基因组DNA为模板，使用所述六十六PCR扩增引物对在一含有RingCap-Taq酶和RingCap buffer的PCR反应体系中进行PCR扩增反应，得PCR扩增反应液；

(2)将上述PCR扩增反应液与SAP酶进行SAP反应，得SAP反应液；

(3)用上述六十六单碱基延伸引物对对上述SAP反应液进行单碱基延伸反应；

(4)将步骤(3)所得的物料经树脂脱盐后，于SpectrocHIP芯片上样，进行质谱检测，即成。

2.如权利要求1所述的多重PCR检测试剂盒，其特征在于：所述PCR扩增反应的条件包括：95℃ 3min，1个循环；95℃ 20s，60℃ 30s，72℃ 20s，45个循环；72℃ 3min，1个循环。

3.如权利要求2所述的多重PCR检测试剂盒，其特征在于：所述SAP反应的条件包括：37℃ 40min，85℃5min，4℃ ∞。

4.如权利要求3所述的多重PCR检测试剂盒，其特征在于：所述单碱基延伸反应的条件包括：

第一阶段共40个循环：每一循环包括：

94℃ 30s，1个循环，94℃ 5s，52℃ 5s，80℃ 5s，5个循环；

第二阶段共1个循环：72℃ 3min。

5.如权利要求1至4中任一权利要求所述的多重PCR检测试剂盒，其特征在于：所述RingCap-Taq酶由Taq酶、DNA连接酶和DNA末端修饰酶组成，比例0.8～1.2∶0.8～1.2∶0.8～1.2。

6.如权利要求5所述的多重PCR检测试剂盒，其特征在于：所述RingCap-Taq酶由Taq酶、DNA连接酶和DNA末端修饰酶组成，比例1∶1∶1。