[发明专利]催化合成可可碱的酶组合物及其在生物制备可可碱中的应用

权利要求书

1.一种催化合成可可碱的酶组合物，其特征在于，包括NdmA酶和NdmD酶；所述NdmA酶的一级结构氨基酸序列如序列表SEQ ID No.1所示；所述NdmD酶的一级结构氨基酸序列如序列表SEQ ID No.2所示。

2.根据权利要求1所述的酶组合物，其特征在于，所述NdmA酶和NdmD酶的质量比为1：1～3；所述NdmA酶的比活力为1～1000U/g；所述NdmD酶的比活力为1～1000U/g。

3.一套编码权利要求1所述酶组合物的基因，其特征在于，NdmA酶的编码基因的核苷酸序列具有如序列表SEQ ID No.3所示；NdmD酶的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.4所示。

4.一种催化合成可可碱的重组载体组合物，其特征在于，所述重组载体组合物包括含有权利要求3所述基因中NdmA酶的编码基因的重组载体质粒-NdmA和含有权利要求3所述基因中NdmD酶的编码基因的重组载体质粒-NdmD。

5.一种催化合成可可碱的重组菌组合物，其特征在于，所述重组菌组合物包括含有权利要求4所述重组载体组合物中质粒-NdmA的重组菌和含有权利要求4所述重组载体组合物中质粒-NdmD的重组菌。

6.权利要求1或2所述酶组合物、权利要求3所述的基因、权利要求4所述的重组载体组合物或权利要求5所述的重组菌组合物在生物制备可可碱中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述生物制备可可碱的方法，包括以下步骤：

(1)构建咖啡因反应体系，所述反应体系中含有底物咖啡因0.1～10g/L，NADH 0.1～10mmol/L，催化剂0.1～1g/mL，硫酸亚铁铵0.1～10mmol/L，过氧化氢酶1～100U/mL和pH值为6.5～7.5的磷酸缓冲液；

所述催化剂包括权利要求1所述的酶组合物或权利要求5所述的重组菌组合物；

(2)将所述反应体系在25～35℃，转速为150～200rpm的条件反应，得到可可碱。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述反应体系中含有底物咖啡因1g/L，NADH 1mmol/L，催化剂0.1g/mL，硫酸亚铁铵1mmol/L，过氧化氢酶100U/mL和20mmol/LpH为7.0的磷酸缓冲液。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，反应的温度为30℃，反应的的转速为180rpm。

10.根据权利要求7～9任意一项所述的方法，其特征在于，所述重组菌需要量为0.1～1g/mL。