[发明专利]一对用于鉴定宁麦9号及其衍生品种赤霉病抗性的引物及应用

说明书

本发明涉及一对用于鉴定宁麦9号及其衍生品种赤霉病抗性的引物及应用。该引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；利用该引物对对小麦基因组DNA进行PCR扩增，产物经琼脂糖凝胶电泳后，若扩增产物中含有800 bp的条带，则说明该待测小麦品种含有宁麦9号相同的赤霉病抗性基因，具有赤霉病抗性，反之，则为易感小麦；利用该引物可以快速而直观获得小麦品种赤霉病抗性结果，适用于大规模育种筛查。

技术领域

本申请涉及小麦育种领域，特别是一对用于筛选宁麦9号及其衍生品种赤霉病抗源的引物序列及其应用。

背景技术

小麦赤霉病（Fusarium head blight，FHB）是由禾谷镰刀菌为主要致病菌引起的一种世界范围广泛流传的重大真菌病害，也是危害我国小麦产业发展的主要病害之一。我国是全球小麦赤霉病受害面积最大的国家之一，传统发病区域为长江中下游冬麦区和东北春麦区。近年来，由于气候变暖和耕作制度的改变，我国小麦赤霉病发病范围呈不断扩大趋势，目前常发区已扩展到黄淮南部麦区，黄淮北部、西南、西北麦区病害发生也明显加重。

小麦赤霉病会导致产量下降，一般发生年份可以造成10%-30%的减产，大流行时损失更大，甚至绝收。赤霉病不仅造成小麦产量降低，还会影响小麦的品质，更为严重的是致病菌侵染后产生的次生代谢产物威胁着人畜健康。因此，积极有效地防控小麦赤霉病对粮食安全和食品安全都具有十分重要意义。

宁麦 9 号是江苏省农业科学院以扬麦 6 号为母本、日本小麦品种“西风”为父本杂交，采用集团选择法选育而成，因具有高产、稳产和广泛的适应性、优质弱筋专用品质及抗小麦黄花叶病、赤霉病等特点，已成为我国江苏省的主栽品种。宁麦 9 号也是我国小麦育种的重要亲本。以该品种为亲本育成了一批适于长江中下游麦区种植的小麦新品种，如宁麦 13、宁麦 14、宁麦 18、生选 4 号、生选 6 号、扬麦 18、扬辐麦 4 号、镇麦 5 号、镇麦 8 号等。宁麦 9 号作为新一代骨干亲本，对选育高产、优质、抗病小麦新品种具有重要的价值。通过选择特异性引物并将其应用于以宁麦 9 号及衍生品种为亲本的抗赤霉病分子标记辅助育种中，可以有效提高小麦杂交育种早世代赤霉病抗性选择的有效性，目前，针对宁麦 9 号及衍生品种赤霉病抗性检测的引物尚未见报道。

发明内容

针对上述问题，为了快速鉴定9号及其衍生品种中赤霉病抗性，本发明提供一种用于筛选宁麦9号及其衍生品种赤霉病抗源的引物序列及其应用。

本发明的目的是这样实现的：一对用于鉴定宁麦9号及其衍生品种的抗赤霉病基因的引物对，其上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。

本发明同时还提供了上述核苷酸序列分别为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物对在鉴定鉴定9号及其衍生品种赤霉病抗性中的应用，即以待测小麦基因组DNA为模板进行PCR扩增反应，再对扩增产物在琼脂糖凝胶中电泳分离检测，若扩增产物中含有800 bp左右大小的条带，则待测小麦有宁麦9号赤霉病抗性，否则待测小麦无赤霉病抗性。

在上述的引物序列的应用中：

PCR扩增的反应体系（25 μL）为：20-100ng的待测小麦基因组DNA，5 U/μL的 Taq酶0.25μL，10 μmol/L的SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2各1 μL，10 mmol/L的 dNTP 0.5 μL，10×PCR的Mg2+ Plus缓冲液2.5 μL，余量为无菌蒸馏水；

PCR扩增的反应条件为：94℃预变性5 min，随后94℃变性30 sec, 58℃条件下退火30sec, 72℃ 延伸40 sec，进行35个循环；最后72℃延伸5 min; 在4℃下保存。

在上述的引物序列的应用中：