[发明专利]用于检测人免疫球蛋白基因重排的毛细管电泳试剂盒及其使用方法

说明书

本申请涉及基因检测领域，具体讲，涉及一种用于检测人免疫球蛋白基因重排毛细管电泳试剂盒及其使用方法。本申请的试剂盒包括核酸扩增试剂和对照品。本申请试剂盒采用PCR加毛细管电泳技术，具有操作简单、检测速度快、灵敏度高、检测结果直观易懂、诊断准确率高的技术优势。

技术领域

本申请涉及基因检测领域，具体讲，涉及一种用于检测人免疫球蛋白基因重排的毛细管电泳试剂盒及其使用方法。

背景技术

恶性淋巴瘤(malignantlymphoma)是免疫系统的原发性恶性肿瘤，主要发生于淋巴器官和淋巴组织。恶性淋巴瘤分为霍奇金淋巴瘤(HL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)两类，在我国，NHL的发病率在恶性淋巴瘤中占绝对优势(95％)，其中又以B-NHL占绝大多数。

淋巴瘤的临床诊断主要依靠淋巴结活检病理的组织形态学检查，由于淋巴结内的细胞增生十分活跃，各种分化阶段的细胞混杂在一起，形态学诊断时更多的依赖常年的工作经验和临床判断。有时，即使在高年病理医师之间，某个病例应当诊断为反应性淋巴结增生还是淋巴瘤，往往容易产生争议。因此，需要寻找一个用于临床评估NHL的快速、特异性强、敏感性高的方法。

随着分子生物学理论和技术的发展，从基因水平研究和分析诊断疾病的技术不断出现并且日趋成熟。早至2001年，WHO淋巴瘤新分类以病理组织学为基础，结合免疫组化、基因分析的诊断方案就体现了这一发展趋势。

分子诊断技术对判断淋巴瘤具有独特的客观优势。B淋巴细胞个体发生中常常可见抗原受体基因的重排，这些基因重排产物在长度和序列上均是唯一的，因此利用聚合酶链式反应(PCR)鉴定抗原受体基因中的重排情况能够判断检测的淋巴细胞群体是否起源于同一细胞，这为淋巴细胞恶性病变诊断提供了又一分析指标。

目前针对免疫球蛋白基因重排检测常用的方法有以下几种：

Southern印迹杂交和PCR电泳技术(PCR+琼脂糖凝胶电泳、PCR+毛细管电泳)均可检测这一重排基因，以判别克隆性质。

Southern杂交是分子生物学的经典实验方法。其基本原理是将待检测的DNA样品固定在固相载体上，与标记的核酸探针进行杂交，如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后用自显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大小。该项技术广泛被应用在遗传病检测、DNA指纹分析和PCR产物判断等研究中。

SouthernBlot技术的检测结果可靠，但该技术需要制备探针，经Southern印迹，分子杂交，放射自显影等步骤，步骤繁杂、费时，并需要较大的DNA且为新鲜或冰冻组织，同时有放射性同位素污染，敏感性较低(5％～10％)等缺点，制约了它在实际临床病理中的应用。

PCR+琼脂糖凝胶电泳技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3′-OH末端，并以此为起始点，沿模板5′→3′方向延伸，合成一条新的DNA互补链。

PCR+琼脂糖凝胶电泳技术具有灵敏度高、简便、快速、对标本的要求低、成本低、易推广的优点。但需通过琼脂糖凝胶电泳、溴化乙锭染色和紫外光进行观察，费时费力，且染色剂溴化乙锭对人体又有害，这些繁杂的实验过程给污染和假阳性提供了机会。并且分辨率低，大约为20bp，容易误判。

鉴于此，特提出本申请。

发明内容

本申请的发明目的在于提出一种用于检测人免疫球蛋白基因重排的试剂盒及其使用方法。

为了完成本申请的目的，采用的技术方案为：