[发明专利]一种黑茶抗氧化活性的荧光分析方法

权利要求书

1.一种黑茶抗氧化活性的荧光分析方法，其特征在于：具体包括以下步骤：

S1、4-甲基-N-乙基喹啉基花菁类衍生物(CyQ)的制备：将4-甲基-N-乙基喹啉、N-[(3-(苯胺基亚甲基)-2-氯-1-环己烯-1-基)亚甲基]苯胺盐酸盐及无水醋酸钠溶于乙醇中，在氮气保护下于80℃反应1h，冷却后，旋蒸除溶剂，然后在氯仿和醋酸钠溶液中搅拌1h，过滤，真空干燥，柱层析分离，得到4-甲基-N-乙基喹啉基花菁类衍生物(CyQ)，便于后续的使用；

S2、荧光探针(CyQ-Cys)溶液的制备：4-甲基-N-乙基喹啉基花菁类衍生物(CyQ)用N，N-二甲基甲酰胺配成10mol/L溶液，半胱氨酸(Cys)用去离子水配成200mmol/L溶液，在离心管中依次加入10mol/L的4-甲基-N-乙基喹啉基花菁类衍生物(CyQ)溶液，逐滴加入200mmol/L的半胱氨酸(Cys)溶液，10mmol/L、pH值为7的磷酸缓冲盐溶液，混合均匀后用N，N-二甲基甲酰胺稀释，反应3min，随后，用荧光分光光度计记录荧光信号的变化，通过卤素-巯基亲核取代和重排反应得到荧光探针(CyQ-Cys)母液；

S3、金属选择性实验：金属盐用去离子水配成1.0mmol/L溶液备用，在荧光池中加入S2步骤中制备的荧光探针(CyQ-Cys)溶液，测其荧光发射光谱，然后加入不同量的不同金属离子溶液，反应3min后，检测其荧光发射光谱，用荧光分光光度计记录荧光信号变化，检测荧光探针(CyQ-Cys)用于Fe³⁺的特异性响应，Fe³⁺与其它金属离子共存时，荧光探针(CyQ-Cys)的抗干扰能力；

S4、Fe³⁺的检测测试：在荧光池中加入S2步骤中制备的荧光探针(CyQ-Cys)溶液，测其荧光发射光谱，然后加入不同浓度的Fe³⁺溶液，检测其荧光发射光谱，用荧光分光光度计记录荧光信号的变化，检测不同浓度的Fe³⁺溶液荧光强度相应的变化情况；

S5、黑茶备用液的制取：称取未处理的安化黑茶和发酵后的安化黑茶于沸水中浸泡10min，残渣在加沸水浸泡2次，滤液合并后浓缩，然后加入容量瓶中，用蒸馏水定容，获得黑茶备用液；

S6、黑茶备用液测试：在荧光池中加入S2步骤中制备的荧光探针(CyQ-Cys)溶液和S5步骤中制取的黑茶备用液，检测其荧光发射光谱，用荧光分光光度计记录荧光信号的变化。

2.根据权利要求1所述一种黑茶抗氧化活性的荧光分析方法，其特征在于：在S1中，所述4-甲基-N-乙基喹啉，N-[(3-(苯胺基亚甲基)-2-氯-1-环己烯-1-基)亚甲基]苯胺盐酸盐及无水醋酸钠的摩尔质量比为4∶1∶4，且所述柱层析分离的展开剂为甲醇和二氯甲烷，且所述甲醇和二氯甲烷的体积比为1∶9。

3.根据权利要求2所述一种黑茶抗氧化活性的荧光分析方法，其特征在于：在S2中，所述4-甲基-N-乙基喹啉基花菁类衍生物(CyQ)溶液与磷酸缓冲盐溶液的体积比为1∶25。

4.根据权利要求1所述一种黑茶抗氧化活性的荧光分析方法，其特征在于：在S3中，所述金属盐采用Al³⁺、Fe²⁺、Cu²⁺，Zn²⁺，Hg²⁺，Pb²⁺，Mn²⁺，Ag⁺或Co²⁺金属盐。

5.根据权利要求1所述一种黑茶抗氧化活性的荧光分析方法，其特征在于：在S5中，所述安化黑茶、发酵后的安化黑茶和水的质量比为1∶1∶10。

6.根据权利要求1所述一种黑茶抗氧化活性的荧光分析方法，其特征在于：在S1-S6中，所述水均采用二次蒸馏水。

7.根据权利要求1所述一种黑茶抗氧化活性的荧光分析方法，其特征在于：在S2、S3、S4、S6中，所述发射光谱的测试条件：激发光和发射光的狭缝宽度均为10nm，电压为500V，激发波长为460nm，平行测试3次。