[发明专利]西伯利亚鲟及以西杂的鉴定方法有效
| 申请号： | 201810693191.2 | 申请日： | 2018-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN108660223B | 公开（公告）日： | 2021-10-29 |
| 发明（设计）人： | 杨世勇;赵仲孟;刘钊;黄小丽;苗懿;杜宗君;罗伟;陈虎;陈德芳;冯杨;段靖;熊关庆;任妍;李涛;张谨啸;张瀚艺;朱凌威;王云维;陈雨薇;杨磊;谭淦;刘洪李;卢永瑞 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888 |
| 代理公司： | 北京元本知识产权代理事务所(普通合伙) 11308 | 代理人： | 常桑 |
| 地址： | 611130 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 西伯利亚 以西 鉴定 方法 | ||
1.西伯利亚鲟及以西杂的鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）以待鉴定的鲟鱼DNA为模版，a、以西伯利亚鲟引物对作为引物进行PCR扩增，如果出现215 bp的扩增产物，则判断为西伯利亚鲟或西杂；或b、以施氏鲟引物对作为引物进行PCR扩增，如果出现252 bp的扩增产物，则判断为施氏鲟或施杂；所述待鉴定的鲟鱼为西伯利亚鲟、施氏鲟、西杂或施杂；所述西杂是指以西伯利亚鲟为母本施氏鲟为父本杂交后代；施杂是指以施氏鲟为母本西伯利亚鲟为父本杂交后代；
（2）对判断为西伯利亚鲟或西杂的鲟鱼DNA进一步鉴定：以待鉴定的鲟鱼DNA为模版，以HLJSX48引物对作为引物进行PCR扩增，如果出现163 bp的扩增产物，则为西杂，否则为西伯利亚鲟；
西伯利亚鲟引物对的前向引物序列为CAGATGCCAGTAACAGGCTGA，后向引物序列为TATACACCATTATCTCTATGT；施氏鲟引物对的前向引物序列为TGTGGGGTCACGGACTTTACAG，后向引物序列为TATACACCATTATCTCTATGT；HLJSX48引物对的前向引物序列为CTAAGCAAGCCTCTCGCTGT，后向引物序列为GTTTTCCCAGTCACGACGTT。
2. 根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，步骤（1）中，以西伯利亚鲟引物对作为引物进行PCR扩增的反应体系为DNA模板1 μL、Mix 12.5 μL、ddH2O 10.5 μL、前向引物0.5 μL、后向引物0.5 μL；PCR反应条件如下：95℃预变性5 min;然后循环35次，每一个循环包括94℃变性40s，50℃退火35s,72℃延伸50s；最后72℃下延伸10 min。
3. 根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，步骤（1）中，以施氏鲟引物对作为引物进行PCR扩增的反应体系为DNA模板1 μL、Mix 12.5 μL、ddH2O 10.5 μL、前向引物0.5 μL、后向引物0.5 μL；PCR反应条件如下：95℃预变性5 min;然后循环35次，每一个循环包括94℃变性40s，53℃退火35s,72℃延伸50s；最后72℃下延伸10 min。
4. 根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，步骤（2）中，PCR扩增的反应体系为DNA模板1 μL、Mix 12.5 μL、ddH2O 10.5 μL、前向引物0.5 μL、后向引物0.5 μL；PCR反应条件如下：95℃预变性5 min;然后循环35次，每一个循环包括94℃变性40s，49℃退火35s,72℃延伸50s；最后72℃下延伸10 min。
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