[发明专利]西伯利亚鲟及以西杂的鉴定方法

说明书

本发明公开了西伯利亚鲟及西杂的鉴定方法，包括如下步骤：(1)以待鉴定的鲟鱼DNA为模版，a、以西伯利亚鲟引物对作为引物进行PCR扩增，如果出现215bp的扩增产物，则判断为西伯利亚鲟或西杂；或b、以施氏鲟引物对作为引物进行PCR扩增，如果出现252bp的扩增产物，则判断为施氏鲟或施杂；(2)对判断为西伯利亚鲟或西杂的鲟鱼DNA进一步鉴定：以待鉴定的鲟鱼DNA为模版，以HLJSX48引物对作为引物进行PCR扩增，如果出现163bp的扩增产物，则为西杂，否则为西伯利亚鲟；可以简单快速地可将西伯利亚鲟及以西伯利亚鲟为母本施氏鲟为父本杂交后代进行区分。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及西伯利亚鲟及西杂的鉴定方法。

背景技术

施氏鲟和西伯利亚鲟是我国的2个重要养殖品种。自然条件下，施氏鲟仅分布于黑龙江（阿穆尔河）水系，是黑龙江的特有种和重要经济鱼类，其生长速度较快，但抗病力差、不耐运输，而且对活饵过于依赖较难驯化，在养殖过程中死亡率较高，加大了鲟鱼养殖业的风险。而西伯利亚鲟主要分布于中亚和东欧，在我国额尔齐斯河水系有少量分布，其生长速度慢，但抗病力强，耐运输。

我国于2007年前后将西伯利亚鲟和施氏鲟的杂交组合繁育成功，因其正、反交的效果差别不大，所以统称为“西杂”。西杂较双亲有明显的生产优势，适应能力较强、生长速度较快、抗病力强、运输存活率高。西杂繁育成功之后，迅速在全国范围内推广养殖，现已成为东北、华北、华东、华中地区的主要养殖品种，是目前我国商品鲟鱼养殖规模与产量最大的品种。

在西杂及其亲本的亲权鉴定方面已开展了部分研究，主要集中在同工酶生化标记研究上。吴艺等采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳对施氏鲟、西伯利亚鲟及其正反杂交种4个群体5种组织(心、肝、肌、眼、肾)的酯酶(EST)、苹果酸脱氢酶(MDH)和乙醇脱氢酶(ADH)3种同工酶进行了分析，发现3种同工酶在各自群体内具有明显的组织特异性;在4个不同鲟鱼群体间也表现出明显的规律性差异,可作为区分这4种鲟鱼的生化遗传标记。尹洪滨等同样采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对4个群体5个组织进行9种同工酶表达分析发现杂交种的酶带表达比亲本复杂，但多与母本酶带表达相近，并通过聚类分析表明施氏鲟、施氏鲟（♀）×西伯利亚鲟（♂）杂交种聚为同一分支,西伯利亚鲟、西伯利亚鲟（♀）×施氏鲟（♂）杂交种聚为另一分支。采用此类方法进行鉴定，虽然操作简单，易于学习掌握，但是样品制备复杂，样本间产生的条带差异较小，极易受到样品采集方法和实验过程中的各种条件的影响，因此近年在鲟鱼鉴别中报道较少，多用于检测人工饲养条件下的鲟鱼个体健康评估与测定。为了能够更好的对西杂及其亲本西伯利亚鲟和施氏鲟进行鉴定，故急需开发一种快速、稳定、可靠的方法，为后续的研究提供可靠的基础。

本发明中的西杂是指以西伯利亚鲟为母本施氏鲟为父本杂交后代；施杂是指以施氏鲟为母本西伯利亚鲟为父本杂交后代。

发明内容

本发明所要解决的技术问题为：如何快速、稳定、可靠地对西伯利亚鲟及西杂的进行鉴定。

本发明的技术方案为：西伯利亚鲟及以西杂的鉴定方法，包括如下步骤：

（1）以待鉴定的鲟鱼DNA为模版，a、以西伯利亚鲟引物对作为引物进行PCR扩增，如果出现215 bp的扩增产物，则判断为西伯利亚鲟或西杂；或b、以施氏鲟引物对作为引物进行PCR扩增，如果出现252 bp的扩增产物，则判断为施氏鲟或施杂；

（2）对判断为西伯利亚鲟或西杂的鲟鱼DNA进一步鉴定：以待鉴定的鲟鱼DNA为模版，以HLJSX48引物对作为引物进行PCR扩增，如果出现163 bp的扩增产物，则为西杂，否则为西伯利亚鲟；