[发明专利]基于双重PCR对大麦抗黄矮病基因Yd2的分子标记辅助选择方法及专用引物

说明书

本发明公开了一种基于双重PCR对大麦抗黄矮病基因Yd2的分子标记辅助选择方法及专用引物，本发明根据与大麦Yd2基因紧密连锁的2个标记设计出2对特异引物对(SEQ ID No.1～4)，建立了一种双重PCR检测方法，一次双重PCR可同时检测双标记位点，可快速准确地判定任何世代大麦个体的Yd2基因型。杂交育种F₂～F_n世代中，仅在F₂代中检测筛选出152bp+100bp带型的个体，就可得到抗性纯合个体(Yd2⁺/Yd2⁺)。回交育种BC₁F₁～BC_nF₁世代中，每代检测并选出具有152bp+100bp+111bp个体参与下次回交；BC_nF₂代中，筛选出152bp+100bp个体，即为抗性纯合个体(Yd2⁺/Yd2⁺)。本发明建立的这种分子标记辅助选择方法，不仅筛选的准确性高、操作简单快速、成本低，而且可大幅降低育种工作量，缩短育种周期，加快育种进程，适合大规模的育种选择。

技术领域

本发明涉及农作物抗病分子育种技术领域，具体涉及基于双重PCR对大麦抗黄矮病基因Yd2的分子标记辅助选择方法及专用引物。

背景技术

黄矮病是由蚜虫传播的大麦黄矮病毒(barley yellow dwarfvirus，简称BYDV)侵染所引起的一种全球性的主要麦类病毒病害。染病后主要表现为叶片黄化、植株矮化、产量减少、品质下降等症状。因而，该病有“黄色瘟疫”之称。全球麦类产区因该病造成的年均损失为11～33％，有些地区甚至高达86％。

选育抗病品种是防治该病最经济、安全、有效的途径。然而，麦类中抗病基因贫乏，仅在埃塞俄比亚大麦种质中发现的Yd2基因对黄矮病具有高而持久的抗性。Yd2 基因是世界上迄今发现的最优异的抗黄矮病基因。目前，国外已经成功地将Yd2基因导入了主栽大麦中，培育出了一些抗病品种。尽管如此，Yd2基因在育种实践中仍没有得到充分利用。

Yd2基因抗性育种所面临的一个最大挑战是育种分离世代中携带Yd2基因个体的筛选十分困难。常规的生物学抗性检测非常繁琐，而且也很难准确地鉴定其抗性水平以及判断Yd2基因的有无，这就极大地限制了Yd2基因在大麦抗病育种中的广泛应用。 Yd2基因属于不完全显性，纯合时高抗，杂合时其抗性则随遗传背景的差异而不同，可能高抗，也可能感病。然而，在育种分离世代中往往是对杂合个体的筛选，这使得 Yd2基因的育种筛选更加困难。

如果采用DNA分子标记辅助选择的方法可直接在各育种分离世代的大麦幼苗期对Yd2基因进行鉴定与筛选，能够克服上述局限，可极大地提高抗性育种的效率，有利于Yd2基因在抗病育种实践中的广泛应用。