[发明专利]检测CYP2D6*10基因突变的检测体系及其试剂盒

权利要求书

1.一种检测CYP2D6*10基因突变的检测体系，其特征在于：包括数字PCR预混液和引物探针混合液；

所述引物探针混合液包括用于检测CYP2D6基因CYP2D6*10位点的上游引物、下游引物和肽核酸探针；

所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQID No.2所示，所述肽核酸探针的核苷酸序列与CYP2D6*10突变型基因位点完全互补且核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；

所述肽核酸探针核苷酸序列的5’端连接有由4个氨基酸构成的强螯合基团，4个氨基酸从5’至3’端依次为谷氨酸、丙氨酸、谷氨酸和谷氨酸，或者为天冬氨酸、丙氨酸、谷氨酸和谷氨酸。

2.根据权利要求1所述的检测CYP2D6*10基因突变的检测体系，其特征在于：所述数字PCR预混液中包括DNA聚合酶、超纯水、dNTPs混合液、液滴稳定剂和缓冲液。

3.根据权利要求1所述的检测CYP2D6*10基因突变的检测体系，其特征在于：所述肽核酸探针的5’端设有报告荧光基团FAM，所述肽核酸探针的3’端设有淬灭荧光基团BHQ。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的检测CYP2D6*10基因突变的检测体系，其特征在于：所述上游引物和下游引物在反应体系中的最终浓度均为0.1～0.3μM/L；所述肽核酸探针在反应体系中的最终浓度为0.18～0.25μM/L。

5.一种采用如权利要求1所述的检测体系的检测CYP2D6*10基因突变检测产品。

6.一种检测CYP2D6*10基因突变的试剂盒，其特征在于：包括数字PCR预混液、引物探针混合液、阳性质控和阴性质控；

所述引物探针混合液包括用于检测CYP2D6*10基因位点的上游引物、下游引物和肽核酸探针；

所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQID No.2所示，所述肽核酸探针的核苷酸序列与CYP2D6*10突变型基因位点完全互补且核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；

所述肽核酸探针核苷酸序列的5’端连接有由4个氨基酸构成的强螯合基团，4个氨基酸从5’至3’端依次为谷氨酸、丙氨酸、谷氨酸和谷氨酸，或者为天冬氨酸、丙氨酸、谷氨酸和谷氨酸；

所述数字PCR预混液包括DNA聚合酶、超纯水、dNTPs混合液、液滴稳定剂和缓冲液；

所述阳性质控是含突变型CYP2D6*10基因标准质粒溶液；

所述阴性质控是含野生型CYP2D6*1基因标准质粒溶液。

7.根据权利要求6所述的检测CYP2D6*10基因突变的试剂盒，其特征在于：所述上游引物和下游引物在反应体系中的最终浓度均为0.1～0.3μM/L；所述肽核酸探针B在反应体系中的最终浓度为0.18～0.25μM/L；所述肽核酸探针的5’端设有报告荧光基团FAM，所述肽核酸探针的3’端设有淬灭荧光基团BHQ。

8.根据权利要求7所述的检测CYP2D6*10基因突变的试剂盒，其特征在于：所述上游引物和下游引物在反应体系中的最终浓度为0.19μM/L；所述肽核酸探针在反应体系中的最终浓度分别为0.21μM/L。

9.根据权利要求6所述的检测CYP2D6*10基因突变的试剂盒，其特征在于：所述数字PCR预混液包括浓度为1U/μL的热启动Taq酶和UDG酶、浓度为4mM的MgCl₂、浓度为50mM的pH值为8.3的Tris-HCl、浓度为300mM的dNTP、浓度为1.6μL/反应的液滴稳定剂。

10.根据权利要求6所述的检测CYP2D6*10基因突变的试剂盒，其特征在于：反应时，40体积的反应体系包括数字PCR预混液10体积，引物探针混合液10体积，模板1体积，灭菌超纯水19体积，所述模板的使用浓度为10ng/μL～100ng/μL。