[发明专利]一种杏鲍菇萎锈灵抗性筛选转化载体及其构建方法和应用在审
| 申请号： | 201810698030.2 | 申请日： | 2018-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN109055420A | 公开（公告）日： | 2018-12-21 |
| 发明（设计）人： | 尚俊军;鲍大鹏;李燕;李焱;杨瑞恒;汪滢;茅文俊;唐利华 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12N15/66;C12N1/15;C12R1/645 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达;魏峯 |
| 地址： | 201106 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 转化载体 杏鲍菇 萎锈灵 构建 抗性筛选 应用 外源基因片段 琥珀酸脱氢酶 遗传学研究 酶切位点 外源基因 质粒载体 点突变 杀菌剂 抗性 真菌 铁硫 转化 | ||
1.一种杏鲍菇萎锈灵抗性筛选转化载体，其特征在于：将带有点突变的琥珀酸脱氢酶铁硫亚基的DNA片段连入质粒载体，记为pTSdi。
2.一种杏鲍菇萎锈灵抗性筛选转化载体的构建方法，包括：
(1)提取杏鲍菇单核菌丝全基因组DNA，检测DNA质量和浓度；
(2)在需要进行点突变的位置引入一对互补引物sdi2F和sdi1R；以提取的基因组DNA为模板，利用正向引物sdi1F和反向引物sdi1R扩增第一部分的DNA片段；以提取的基因组DNA为模板，利用正向引物sdi2F和反向引物sdi2R扩增第二部分的DNA片段；利用限制性内切酶MfeI消化两部分DNA片段，再采用T4连接酶将消化后的两部分DNA片段连接成完整DNA片段；
(3)将完整DNA片段通过TA载体连接，导入pGEM-Teasy质粒载体中，获得转化载体pTSdi。
3.根据权利要求2所述的一种杏鲍菇萎锈灵抗性筛选转化载体的构建方法，其特征在于：所述步骤(2)中的sdi1F的序列为：TCACGTCCTCAATAAGCGCTC；
sdi1R的序列为：ACAATTGAAAATGGTGAGGC；
sdi2F的序列为：GCCTCACCATTTTCAATTGT；
sdi2R的序列为：AGCACCGCAAGTGAGACCAA。
4.一种如权利要求1所述的杏鲍菇萎锈灵抗性筛选转化载体的应用，其特征在于：应用于携带外源基因进行杏鲍菇的遗传转化。
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