[发明专利]用于增强免疫响应的复合物的制备方法

权利要求书

1.一种用于增强免疫响应的复合物的制备方法，包括：

将聚肌胞、一种阳离子稳定剂以及可溶性钙盐在液体反应体系中接触得到复合物；

在进行接触反应之前，将所述聚肌胞80℃~99℃下加热70~120min；

所述阳离子稳定剂为分子量≤5kDa的壳寡糖，或壳寡糖与聚乙二醇单甲醚、聚乙二醇、聚乙烯亚胺、叶酸、半乳糖中的一种或多种所形成的接枝物；

将交联剂溶液在搅拌条件下逐滴加入制得的复合物中直至观察到反应体系中出现丁达尔现象后停止滴加，得到含有纳米粒子的复合物溶液；

所述交联剂选自三聚磷酸钠、海藻酸钠、苯基硼酸、苯邻二酚中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的制备方法，所述阳离子稳定剂选自壳寡糖、壳寡糖与聚乙二醇单甲醚的接枝物、壳寡糖与聚乙二醇单甲醚和聚乙烯亚胺的接枝物。

3.根据权利要求1所述的制备方法，所述接枝物的分子量≤50kDa。

4.根据权利要求1所述的制备方法，在所述液体反应体系中，所述聚肌胞的浓度为0.1~10mg/ml。

5.根据权利要求4所述的制备方法，在所述液体反应体系中，所述聚肌胞的浓度为0.5~5mg/ml。

6.根据权利要求1所述的制备方法，在所述液体反应体系中，所述阳离子稳定剂的浓度为0.5~51.2mg/ml。

7.根据权利要求6所述的制备方法，在所述液体反应体系中，所述阳离子稳定剂的浓度为0.8~25.6mg/ml。

8.根据权利要求1所述的制备方法，在所述液体反应体系中，所述可溶性钙盐中钙离子的浓度为0.1~1mM。

9.根据权利要求1所述的制备方法，所述壳寡糖脱乙酰度大于等于70%。

10.根据权利要求1所述的制备方法，所述可溶性钙盐选自CaCl₂和/或CaNO₃。

11.根据权利要求1所述的制备方法，所述聚肌胞由聚胞苷酸和聚肌苷酸经碱基配对反应制得。

12.根据权利要求11所述的制备方法，所述聚胞苷酸、聚肌苷酸分子量大于2.3万道尔顿。

13.根据权利要求12所述的制备方法，所述聚胞苷酸的分子量范围是在6.6万道尔顿~66万道尔顿。

14.根据权利要求12所述的制备方法，所述聚肌苷酸的分子量范围是在6.6万道尔顿~66万道尔顿。

15.根据权利要求11~14任一项所述的制备方法，所述碱基配对反应在40℃~50℃的温度下进行。

16.根据权利要求11~14任一项所述的制备方法，所述碱基配对反应在pH=6.8~7.6下进行。

17.根据权利要求1所述的制备方法，在进行接触反应之前，所述聚肌胞88℃~92℃下加热70~120min。

18.根据权利要求1所述的制备方法，所述液体反应体系的温度为40℃~50℃。

19.根据权利要求1所述的制备方法，所述接枝物的制备方法包括：

先用羰基二咪唑活化聚乙二醇单甲醚、聚乙二醇、聚乙烯亚胺、叶酸、半乳糖中的一种或多种，再用活化好的产物与所述水溶性非抗生素氨基化合物在离子液体[bmim]Cl中进行接枝反应。