[发明专利]用于增强免疫响应的复合物的制备方法

说明书

本发明涉及一种新颖的复合物，并对该复合物的制备、应用等方面进行研究。所述复合物的制备方法包括：将聚肌胞、至少一种阳离子稳定剂以及可溶性钙盐在液体反应体系中接触；所述阳离子稳定剂为分子量≤5kDa的水溶性非抗生素氨基化合物，或所述水溶性非抗生素氨基化合物与聚乙二醇单甲醚、聚乙二醇、聚乙烯亚胺、叶酸、半乳糖中的一种或多种所形成的接枝物。该复合物黏度和分子质量适中，制药方便，化学性质稳定，长期储存不易降解，使用安全，该复合物单独使用即可显著地增强机体非特异性的免疫反应，达到防治疾病的目的，与其他药物联合使用具有更好的抗肿瘤、抗病毒和抗(超级)细菌功效，易被患者所吸收。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体而言，涉及一种用于增强免疫响应的复合物的制备方法。

背景技术

双链RNA(dsRNA)佐剂目前一般认为包括PIC(polyriboinosinic-polyribocytoidylic acid)、PICLC(PIC with poly-L-lysine andcarboxymethylcellulose)、PIC₁₂U(PIC with uridylic acid in specific interval，商品名Ampligen)和PICKCa((PIC-kanamycin-CaCl₂)，是多种膜式识别受体(PRRs)的配体，一方面增强免疫反应，另一方面通过改变免疫类型，有可能使预防性疫苗成为治疗性疫苗。

PIC(聚肌胞)是上世纪60年代由美国默克公司研制的。在小白鼠中，PIC是IFN-α诱生剂，有抗病毒活性。PIC可以保护小白鼠鼻腔和肺部致死性的感染。然而由于灵长类动物和人血清核酸酶对PIC的降解，减低PIC结构的稳定性，只产生很少IFN-α，也不具有抗肿瘤活性。

PICLC(聚肌胞+赖氨酸+羧甲基纤维素)是Levy HB等上世纪70年代研制的，即PIC与聚赖氨酸(PolyL-lysine，相对分子质量27 000)和羧甲基纤维素(CMC，相对分子质量700000)的结合物，使相对分子质量增大了许多，较PIC能5-10倍抵抗灵长目动物核酸酶水解，并在猴体内产生显著的干扰素(15)。PICLC初步的临床研究表明治疗剂量就引起中到重度反应，发烧(100％)，肌痛(50％)，低血压(50％)，白细胞明显下降等。这造成分子量大毒性大的误区。

PIC₁₂U是上世纪70年代中期在美国约翰霍普金斯大学研制的，是在PIC链一定位置插入尿嘧啶核苷酸。效力类似PIC，但毒性较少。2012年8月Hemispherx生物药品公司呈送了进一步原始的临床研究资料，但还是以安全性和有效性资料不足被美国食品药品管理局(FDA)否决了。

PICKCa含有抗生素卡那霉素，卡那霉素具有中有耳毒性，并且在疫苗中含量超过国家药典规定的标准。

可见，单纯PIC不能用于灵长类以上动物包括人，而PICLC副作用大被美国FDA否定，PIC₁₂U则因为效果差而被美国FDA否定，而PICLC实际上也具有很强的副作用。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明涉及一种新颖的复合物，并对该复合物的制备、应用等方面进行研究。

在发明人之前的工作中，采用PIC、卡那霉素、氯化钙配制疫苗佐剂(商品名叫皮卡佐剂或PIKA佐剂)。使用卡那霉素是缘于其含有4个氨基与PIC中羧基结合稳定其结构，但该商品却因含有抗生素而限制了在疫苗中的应用。

进一步的，发明人发现使用壳聚糖(盐酸盐)替换卡那霉素也同样可以起到阳离子稳定剂的作用，然而壳聚糖(盐酸盐)分子量大，不易被人体所吸收，因而难以获得理想的药效。

因此，本发明提供一种用于增强免疫响应的复合物。该复合物至少由以下成分在适宜条件下制备得到：