[发明专利]一种养殖废水中氟喹诺酮类兽药抗生素样品前处理装置及含量测定方法

权利要求书

1.一种养殖废水中氟喹诺酮类兽药抗生素含量测定方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)取养殖废水水样，通过玻璃纤维滤纸过滤，用硫酸溶液和氢氧化钠溶液调节pH值至3.0；

(2)向养殖废水水样中加入回收率指示剂和金属离子耦合剂Na₂-EDTA，振荡使其充分混匀；

(3)向养殖废水水样中加入内标物质诺氟沙星-D⁵，使其混合均匀；

(4)自制改性甲醛树脂填充的过滤净化柱，过滤净化柱依次用甲醇、乙腈和高纯水淋洗进行活化，将过滤净化柱串联固相萃取柱组装到位；

(5)匀速使养殖废水水样通过过滤净化柱和活化好的固相萃取小柱，富集完成后用高纯水和10％的甲醇淋洗，弃去全部流液后在真空条件下抽空；

(6)用甲醇对步骤(5)中的固相萃取小柱进行洗脱，收集洗脱液于试管中，40–45℃水浴条件下氮吹浓缩至近干；

(7)用10％甲醇溶液定容至1.0mL，通过0.22μm滤膜后装入样品瓶中；

(8)使用高效液相色谱-串联质谱法HPLC-MS/MS进行测定；

所述HPLC-MS/MS的色谱条件为：SHIMADZU色谱柱Shim-pack GIST 2μmC18柱，2.1×100mm，色谱柱温度30℃，流速0.40mL/min，进样量为2μL，流动相A为乙腈，B为0.1％甲酸溶液；梯度淋洗条件为：0～2min，10％A，2～2.5min，10％～40％A，2.5～5min，40％～90％A，5～6.5min，90％～100％A，6.5～10min，100％A，最后还原初始流动相状态并保持2min；质谱条件为：离子源为电喷雾离子源，正离子模式下扫描，检测方式为多反应监测，雾化器压力40psi，干燥气流速8L/min，温度为350℃，毛细管电压4000eV；

所述自制改性甲醛树脂过滤净化柱根据养殖废水的特点制备而成，方法如下：(1)溶液的配制：将希夫碱、邻苯二胺和甲醛按照摩尔比1：1～3：2～5混合在一起，形成混合物，按照混合物和去离子水固液比1：20～50添加去离子水，配制成混合溶液，在每升混合溶液中加入0.1～0.3mg的氢氧化钠，最终形成多组分甲醛混合溶液；(2)聚合反应：将多组分甲醛混合溶液在135～145℃油浴中回流125～155分钟；冷却过滤后得到希夫碱改性甲醛树脂，先用去离子水清洗2～5次，再用石油醚清洗3～5次，在60～65℃下真空干燥，干燥后研磨至50～80目；(3)金属负载：每升无水乙醇溶液中加入16.9～39.5毫升硝酸锰溶液，58～79mg研磨后的希夫碱改性甲醛树脂，将改混合溶液在55～58℃的水浴下以75～90转/分钟的速度搅拌90～160分钟，过滤和得到的聚合物，先用乙醇清洗2～5次，再用石油醚清洗3～5次，在66～68℃下真空干燥，冷却后得到锰-希夫碱改性甲醛聚合物。

2.根据权利要求1所述一种养殖废水中氟喹诺酮类兽药抗生素含量测定方法，其特征在于，所述步骤(1)中用1mol/L的硫酸溶液和1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至3.0。

3.根据权利要求1所述一种养殖废水中氟喹诺酮类兽药抗生素含量测定方法，其特征在于，待测的氟喹诺酮类兽药抗生素包括依诺沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、洛美沙星、达氟沙星、沙拉沙星和西诺沙星一种或多种。

4.根据权利要求1所述一种养殖废水中氟喹诺酮类兽药抗生素含量测定方法，其特征在于，所述的步骤(1)中通过0.45μm的玻璃纤维滤纸。

5.根据权利要求1所述一种养殖废水中氟喹诺酮类兽药抗生素含量测定方法，其特征在于，所述的步骤(2)中金属离子耦合剂Na2-EDTA的添加量为0.2g。

6.根据权利要求1所述一种养殖废水中氟喹诺酮类兽药抗生素含量测定方法，其特征在于，步骤(4)中有机溶剂和高纯水活化小柱时用量为：甲醇1管柱，乙腈2管柱，高纯水3管柱。