[发明专利]环介导等温扩增检测肺炎支原体的试剂盒及方法在审
| 申请号： | 201810704561.8 | 申请日： | 2018-07-02 |
| 公开（公告）号： | CN108642196A | 公开（公告）日： | 2018-10-12 |
| 发明（设计）人： | 李锦;莫茜;曹清;陶悦;沈楠;唐铭钰;潘艺;赵瑞珂;干驰;王莹;王薇;李璧如;胡肖伟 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海韧辰专利代理有限公司 31331 | 代理人： | 刘秋兰 |
| 地址： | 200127 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 试剂盒 肺炎支原体 环介导等温扩增检测 外部引物 引物组 上游内部引物FIP 下游内部引物BIP 基层医疗单位 特异性强 灵敏度 上游 检测 | ||
1.一种环介导等温扩增检测肺炎支原体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括引物组，所述引物组由SEQ ID NO:1所示的上游外部引物F3、SEQ ID NO:2所示的下游外部引物B3、SEQ ID NO:3所示的上游内部引物FIP和SEQ ID NO:4所示的下游内部引物BIP组成。
2.如权利要求1所述的环介导等温扩增检测肺炎支原体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括环介导等温扩增反应试剂和指示剂。
3.如权利要求2所述的环介导等温扩增检测肺炎支原体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括肺炎支原体阳性质控标准品。
4.如权利要求2所述的环介导等温扩增检测肺炎支原体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括作为阴性对照的无核糖核酸酶的去离子水。
5.如权利要求2所述的环介导等温扩增检测肺炎支原体的试剂盒，其特征在于所述环介导等温扩增反应试剂包括：Bst 2.0DNA聚合酶和10mM dNTP混合物。
6.如权利要求2所述的环介导等温扩增检测肺炎支原体的试剂盒，其特征在于，所述指示剂为伊万绿色荧光染料、钙黄绿素或羟基萘酚蓝指示剂。
7.如权利要求1所述的环介导等温扩增检测肺炎支原体的试剂盒，其特征在于，所述外引物F3浓度为0.2μM、外引物B3浓度为0.2μM、内引物FIP浓度为1.6μM、内引物BIP浓度为1.6μM。
8.一种利用环介导等温扩增检测肺炎支原体的方法，其特征在于包括如下步骤：
S1，提取样本DNA；
S2，将样本DNA与引物组、环介导等温扩增反应试剂和指示剂混合得到混合物；
S3，混合物置于64℃恒温水浴中反应15min，80℃反应20min灭活Bst 2.0DNA聚合酶。
S4，反应结束后观察颜色变化，以判断样本里是否具有肺炎支原体。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，在步骤S3中，混合物先短暂离心再置于64℃恒温水浴中反应15min。
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