[发明专利]一种检测恒河猴血浆中碘海醇含量的方法及其在评价药物影响GFR中的应用

权利要求书

1.一种检测恒河猴血浆中碘海醇含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)标准品工作液及标准曲线的制备：配制多个浓度的标准品工作液，所述标准品工作液为碘海醇的甲醇溶液；

2)内标标准品溶液的制备：配制碘海醇杂质I工作液；

3)样品前处理：取空白血浆10-50μL，加入相应浓度的标准品工作液或质控样品溶液10-50μL，加入内标溶液40-100μL，混匀，离心，取上层清液30-80μL，混入100-400μL纯水，混匀，备用；

4)碘海醇的测定，其中，色谱条件如下：

色谱柱：为C18色谱柱；

流动相：流动相A：甲醇，流动相B：水；

等度洗脱：洗脱时间3-10min；

温度：20℃～40℃；

流速：0.2mL/min～1.5mL/min；

检测器：UV；

色谱图检测波长：190nm～320nm；

进样体积：1μL～20μL。

2.根据权利要求1所述的一种检测恒河猴血浆中碘海醇含量的方法，其特征在于，步骤1)中，多个标准品工作液的浓度分别为800-1000μg/mL、600-800μg/mL、400-600μg/mL、200-400μg/mL、100-200μg/mL、50-100μg/mL、25-50μg/mL和10-25μg/mL。

3.根据权利要求2所述的一种检测恒河猴血浆中碘海醇含量的方法，其特征在于，步骤1)中，称取碘海醇标准品5-20mg，精密称定，置于5-20mL容量瓶中，加入甲醇溶解完全后，用甲醇定容至刻度线，混匀即得0.5-2mg/mL的储备液；再取储备液按等比逐级稀释得到所述标准品工作液的浓度。

4.根据权利要求1所述的一种检测恒河猴血浆中碘海醇含量的方法，其特征在于，步骤2)中，称取碘海醇杂质I标准品5-20mg，精密称定，置于5-20mL离心管中，先加入1-4mL超纯水超声溶解后，转移至5-20mL容量瓶中，用甲醇清洗离心管2-4次并将洗液转移至容量瓶中，用甲醇定容至刻度线，混匀即得0.5-2mg/mL的储备液；取0.5-2mg/mL的储备液2-10mL加入20-60mL甲醇中，充分混匀即得50-200μg/mL的碘海醇杂质I工作液。

5.根据权利要求1所述的一种检测恒河猴血浆中碘海醇含量的方法，其特征在于，步骤3)中，混匀采用涡旋混匀，离心转速为5000-14000rpm，离心时间5-20min。

6.根据权利要求1所述的一种检测恒河猴血浆中碘海醇含量的方法，其特征在于，步骤4)中，所述C18色谱柱以C18为基础，填料为硅胶的色谱柱；内径为1-6mm，粒径1.5-7μm；长度50-400mm的色谱柱。

7.根据权利要求6所述的一种检测恒河猴血浆中碘海醇含量的方法，其特征在于，步骤4)中，所述流动相B为磷酸水，所述磷酸水的PH＝2-5。

8.根据权利要求7所述的一种检测恒河猴血浆中碘海醇含量的方法，其特征在于，步骤4)中，所述等度洗脱采用15％-30％的流动相A和85-70％的流动相B；温度：20-40℃；流速：0.5-1.5mL/min；色谱图检测波长：220-380nm；进样体积：5-15μL。

9.根据权利要求1-8任意一项所述的一种检测恒河猴血浆中碘海醇含量的方法，其特征在于，步骤4)中，所有标准品、质控样品和恒河猴血浆样品均需要重复检测2-3次，所有样品的RSD不得大于4-7％；若RSD大于4-7％，则需要重新配制样品，再检测。

10.权利要求1-9任意一项所述方法在评价药物影响GFR中的应用。