[发明专利]一种检测恒河猴血浆中碘海醇含量的方法及其在评价药物影响GFR中的应用

说明书

本发明公开一种检测恒河猴血浆中碘海醇含量的专属方法及其在评价药物影响GFR中的应用，属于药物评价领域，包括以下步骤：1)标准品工作液及标准曲线制备：配制多个浓度的标准品工作液；2)内标标准品溶液的制备：配制碘海醇杂质I工作液；3)样品前处理；4)碘海醇的测定：色谱柱：C18柱；流动相：流动相A：甲醇，流动相B：磷酸水；等度洗脱：洗脱时间10min；温度：20℃～40℃；流速：0.2mL/min～1.5mL/min；色谱图检测波长：190nm～320nm；进样体积：1μL～20μL。本发明检测碘海醇的含量，准确简便，省时省力；利用碘海醇清除率测定评估肾小球滤过率所需碘海醇剂量较小，极大地提高了肾脏安全性；该方法简便可靠，专属性强，能够为临床提供有效的实验数据。

技术领域

本发明涉及一种检测恒河猴血浆中碘海醇含量的方法及其在评价药物影响GFR中的应用，特别涉及一种检测恒河猴血浆中碘海醇含量的方法，属于药物评价领域。

背景技术

近年来慢性肾病(CKD)对人类的健康与生命已构成严重威胁。2013年，全世界3.47亿人罹患糖尿病，WHO认为到2030年，慢性肾病将是导致人类死亡的主要疾病之一，造成了严重的社会和经济负担。CKD的临床表现为肾小球率过滤(GFR)和尿微量白蛋白的升高。大量证据表明遗传因素、高血糖症、高血压以及高血脂都会导致或促进CKD的进程。尽管CKD正在逐渐被认识到是肾病中最主要的致病和致死的原因，现在依然没有针对CKD靶点的治疗方法，只能控制其他因素，如血压和血糖水平。

碘海醇(iohexol)又称碘苯六醇，是一种含碘造影剂。24h内几乎全部经肾小球滤过排泄，碘海醇血浆清除率可以作为衡量肾小球滤过率(GFR) 的标准。一般血样中的碘海醇浓度较低，无法通过一般化学方法检测，需依赖特殊仪器进行检测，如荧光光谱分析、毛细血管电泳法、高效液相色谱法等。由于不同方法间灵敏度的差异，测量的碘海醇剂量各不相同。其中高效液相色谱仪可显著减少碘海醇使用的剂量，其用于评估肾功能时所用剂量约为5mL，为常规造影剂量的1/20，大大降低副反应发生率，评价准确，节约成本。

目前针对慢性肾病的研究实验对象主要是啮齿类动物，但啮齿类动物其发病机制及病理生理改变与人类肾病差别较大，研究结果的应用有很大局限性。非人灵长类动物与人类遗传物质有高度同源性，在组织结构，生理代谢及免疫系统等方面与人类高度相似，是最理想的非人慢性肾病模型实验动物。其中，恒河猴是文献报道使用最多的非人灵长类慢性肾病模型，其肾脏病变特点与人类慢性肾病相似，可持续观察肾脏相关血液，尿液，活检指标，是极具价值肾病研究模型。自发性慢性肾病恒河猴的发病机理和病程发展与人类高度相似，同时也避免了对各器官的毒性损伤，是进行临床前药效试验的最佳选择。

目前临床用于肾病检测的方法多种，用于药物评价的疾病检测方法需要更准确更稳定，不仅检测同一个患者的GFR，而是检测GFR在不同时间段的变化程度。因此，建立一种准确稳定评价自发性慢性肾病恒河猴血浆中碘海醇的方法，对慢性肾病的基础研究和临床早期诊断，药效评价有着重要意义。